Ambos apuntan a reducir la pulsación, pero con diferentes énfasis. El diseño conectado en serie destaca por mantener una precisión y estabilidad del flujo excepcionales en condiciones de flujo bajos y alta presión, lo que los hace ideales para aplicaciones que requieren una estabilidad de referencia ultra alta, como análisis convencionales y microfluidos. El diseño paralelo demuestra un control de pulsación superior a caudales medios a altos, admite un rango de flujo más amplio y presenta una estructura más compacta, lo que los hace ideales para laboratorios semipreparativos, preparativos y de alto rendimiento que requieren un lavado rápido.

Esto está relacionado principalmente con la complejidad de la matriz de la muestra y la efectividad del pretratamiento. Si la matriz de la muestra analizada es compleja (p. ej., muestras biológicas, muestras de agua ambiental) y no se trata adecuadamente, las impurezas moleculares grandes y las partículas en la muestra pueden obstruir rápidamente el sistema de filtración y la columna cromatográfica, lo que provoca mayores fluctuaciones de presión. Por el contrario, las muestras puras causan menos contaminación del sistema y mantienen una presión relativamente estable. Además, las variaciones en la viscosidad de la muestra también afectan la presión. Las muestras de alta viscosidad exhiben mayores cambios de resistencia durante el flujo a través de la columna cromatográfica, lo que hace más probables las fluctuaciones de presión. Se recomienda optimizar el proceso de pretratamiento para muestras de matrices complejas incorporando pasos como la extracción en fase sólida (SPE) y la centrifugación para garantizar una filtración completa de la muestra.

En esta etapa, dé prioridad a la inspección de la columna analítica y del sistema de tubos. Primero, desconecte la entrada de la columna analítica y active la bomba para medir la presión en la tubería aguas arriba. Si la presión es normal, el problema está en la columna analítica. Puede intentar un lavado inverso utilizando un disolvente compatible (p. ej., metanol-agua = 90:10 para columnas de fase invertida). Si la presión permanece alta después del lavado, el lecho de la columna puede colapsar o el material de relleno se puede degradar, lo que requerirá el reemplazo de la columna analítica. Si la presión de la tubería aguas arriba persiste, verifique que no haya curvaturas en la tubería o impurezas residuales en las paredes internas. El tubo se puede desmontar y lavar con metanol o isopropanol y, si es necesario, se deben reemplazar tubos nuevos.

Lo más probable es que esta situación se deba a burbujas de aire dentro del sistema o a una mezcla desigual de disolventes. En primer lugar, comprobar si la desgasificación de la fase móvil es adecuada. Puede volver a realizar la desgasificación ultrasónica o activar la unidad de desgasificación en línea para extender el tiempo de desgasificación. En segundo lugar, investigue si hay burbujas de aire en el cabezal de la bomba expulsando completamente el aire a través de la función de desgasificación manual. Si es un modo de elución en gradiente, confirme que la válvula de relación esté funcionando correctamente. Puede intentar mezclar manualmente la fase móvil y realizar pruebas de elución isocrática para observar si la presión permanece estable.

La deriva gradual es causada principalmente por diferencias significativas en la absorción de UV entre dos o más fases móviles durante el cambio de gradiente, o por una desgasificación inadecuada y una mezcla desigual de las fases móviles. Estrategias de optimización: ① Realizar una desgasificación exhaustiva (mediante desgasificación ultrasónica o desgasificación en línea) para todas las fases móviles para minimizar la interferencia de las burbujas con la línea de base; ② Aumente el tiempo de equilibrio antes de la elución en gradiente para garantizar la mezcla completa de las fases móviles y el equilibrio completo de la columna; ③ Para casos con variaciones de absorción pronunciadas, seleccione componentes de fase móvil con longitudes de onda de absorción similares o ejecútelos en condiciones de gradiente en blanco para obtener espectros de referencia. El software de procesamiento de datos posterior debería restar la línea base del gradiente en blanco para mejorar la precisión de la integración.

Instrucciones principales para la solución de problemas: ① Problemas de inyección de muestra, como inyección fallida o válvula de inyección mal cambiada; ② Problemas con la columna cromatográfica, como bloqueo de la columna que impide la elución de la muestra o tubos desconectados entre la columna y el detector; ③ Problemas con el detector, como configuraciones de longitud de onda incorrectas (que no coinciden con las longitudes de onda de absorción de los componentes) o falta de flujo de fase móvil en la celda de detección. Pasos para la solución de problemas: primero, inyecte manualmente una muestra estándar para verificar los problemas de inyección y verificar el estado de la válvula de inyección; luego observe la presión del sistema. Una presión anormalmente alta puede indicar un bloqueo de la columna, lo que requiere lavado o reemplazo de la columna, junto con una inspección de la tubería; Finalmente, verifique los parámetros de longitud de onda del detector para garantizar la coherencia con los métodos estándar y verifique la celda de detección en busca de burbujas o bloqueos.

Las causas principales incluyen: ① Problemas en el sistema de muestreo, como agujas de muestreo obstruidas, volumen de muestra inexacto o sellos viejos en el muestreador automático; ② Mala estabilidad de la muestra que conduce a la degradación o polimerización en el disolvente; ③ Equilibrio de fase móvil inadecuado y presión del sistema inestable. Soluciones: Primero, verifique la permeabilidad de la aguja de muestreo, reemplace los sellos viejos y calibre el muestreador automático. En segundo lugar, evalúe la estabilidad de la muestra: la preparación y la inyección deben realizarse inmediatamente si la muestra es propensa a degradarse, o se deben agregar estabilizadores. Finalmente, extienda el tiempo de equilibrio de la fase móvil y espere a que se estabilice la presión del sistema antes de continuar con el muestreo y el análisis.

UHPLC representa una actualización avanzada de HPLC, que utiliza una presión más alta (>1000 bar) y materiales de empaque de tamaño de partículas más pequeño (<2μm), lo que ofrece un rendimiento más rápido y una sensibilidad mejorada. Sin embargo, su relación no es de "reemplazo" sino de "complementariedad y evolución". UHPLC impone mayores exigencias en cuanto al pretratamiento de muestras, el mantenimiento del sistema y la experiencia del operador. Recomendaciones para la toma de decisiones: ① Para los laboratorios que se dedican principalmente al control de calidad de rutina con metodologías fijas, los sistemas HPLC maduros brindan mayor estabilidad y rentabilidad; ② Para investigaciones de vanguardia que requieren un procesamiento de velocidad ultrarrápida de grandes volúmenes de muestras (p. ej., metabolómica) con un presupuesto adecuado, la UHPLC es una opción prudente; ③ Considere la compatibilidad futura, ya que las plataformas HPLC de algunos fabricantes se pueden actualizar con bombas y módulos para admitir futuros métodos UHPLC.