La verificación de instrumentos HPLC es un proceso sistemático que sigue un concepto de ciclo de vida, que comprende cuatro etapas: calificación de diseño, calificación de instalación, calificación operativa y calificación de desempeño.
I. Base regulatoria y propósito de la verificación
Objetivo
Garantizar que el instrumento funcione de manera consistente y estable desde la instalación durante todo su ciclo de vida, produciendo datos confiables y precisos.
Para cumplir con requisitos regulatorios como GMP y GLP.
Para reducir el riesgo de fallas analíticas, retiradas de productos o problemas de cumplimiento causados por problemas de instrumentos.
Regulaciones/directrices clave
Capítulos Generales de la USP: En particular, la calificación de instrumentos analíticos USP <1058> clasifica el HPLC como un instrumento de Clase B, que requiere IQ/OQ/PQ completo.
BPM/BPL: Buenas Prácticas de Fabricación/Buenas Prácticas de Laboratorio.
ICH Q2(R1): Validación de Procedimientos Analíticos – aunque se centra en métodos, sus requisitos están estrechamente relacionados con la PQ.
II. Las cuatro etapas de la verificación
La siguiente es una explicación detallada de las cuatro etapas de verificación específicas de los instrumentos HPLC.:
Definición: Antes de comprar el instrumento, confirme que sus especificaciones de diseño y funciones satisfagan las necesidades del usuario y las tareas analíticas previstas.
Actividades clave:
Definir los requisitos analíticos (p. ej., sensibilidad, precisión, rango de caudal, etc.).
Evalúe las especificaciones de instrumentos de diferentes proveedores (precisión de la bomba, rango lineal del detector y ruido, arrastre del muestreador automático, etc.).
Confirmar las calificaciones del proveedor y el servicio postventa.
Desarrollar un documento de Especificación de requisitos del usuario (URS).
Salidas: URS, informe de evaluación de proveedores, orden de compra (incluyendo especificaciones técnicas).
Definición: Confirme que el instrumento se haya entregado e instalado correctamente de acuerdo con las especificaciones del fabricante y que el entorno de instalación cumpla con los requisitos.
Actividades clave:
Recibir inspección: Verifique la lista de empaque para asegurarse de que todos los componentes (bomba, muestreador automático, horno de columna, detector, software de la estación de trabajo, repuestos, etc.) estén presentes y sin daños.
Entorno de instalación: Verifique que el suministro de energía, la conexión a tierra, la temperatura/humedad ambiente, la estabilidad del banco, la ventilación, etc., cumplan con los requisitos especificados.
Documentación: Recopile y archive todos los documentos necesarios, como manuales de operación, copias de seguridad de software, planos de instalación y certificados.
Verificación de software: Registre la versión del software de la estación de trabajo, confirmando la correcta instalación y licencia.
Verificación de conexión: Verifique las conexiones correctas entre los módulos y asegúrese de que no haya fugas en la tubería.
Salidas: Lista de verificación de coeficiente intelectual, registros de documentación archivados.
Definición: Confirme que todas las funciones del instrumento funcionen normalmente dentro de los rangos operativos especificados, según el diseño del fabricante.
Actividades clave (probadas utilizando estándares de referencia o herramientas específicas):
Bomba:
Precisión del flujo: Mida los caudales reales en diferentes puntos de ajuste (p. ej., 0,5, 1,0, 2,0 ml/min) y compárelos con los valores establecidos.
Precisión de flujo: Calcule la RSD de múltiples mediciones de caudal a un caudal fijo.
Pulsación de presión y estabilidad.: Observe las fluctuaciones de presión.
Muestreador automático:
Precisión de inyección: Inyecte diferentes volúmenes de solución estándar y examine la RSD de las áreas de los picos.
Precisión de inyección: Inyecte repetidamente el mismo volumen de solución estándar y examine la RSD de las áreas de los picos.
Continuar: Inyecte una muestra de alta concentración seguida de un disolvente en blanco y compruebe si hay picos residuales en el cromatograma en blanco.
Horno de columna:
Precisión y estabilidad de la temperatura.: Mida la temperatura real dentro del horno con una sonda de temperatura calibrada, compárela con la temperatura establecida y examine el rango de fluctuación.
Detector (usando un detector UV/Vis común como ejemplo):
Precisión de longitud de onda: Verifique que la longitud de onda mostrada coincida con la longitud de onda real utilizando un material de referencia con picos de absorción característicos (por ejemplo, un filtro de óxido de holmio).
Ruido y deriva: Ejecute la línea de base en condiciones específicas (p. ej., 254 nm, 0 AUFS) y mida el ruido a corto plazo y la deriva a largo plazo.
Linealidad: Inyecte una serie de soluciones estándar en diferentes concentraciones y examine la relación lineal entre respuesta y concentración (coeficiente de correlación R²).
sistema general:
Precisión del gradiente: Verifique que la composición del gradiente real coincida con los valores establecidos mediante pruebas específicas (por ejemplo, pruebas de gradiente de baja o alta presión).
Salidas: Protocolo e informe de prueba de OQ, incluidos todos los datos sin procesar y los criterios de aceptación.
Definición: Una vez completada la OQ, realice pruebas utilizando condiciones similares al método analítico real para simular el proceso de análisis real, demostrando que todo el sistema cumple consistentemente con los estándares de rendimiento predeterminados en condiciones experimentales específicas.
Actividades clave:
Prepare una solución de prueba de idoneidad del sistema, que normalmente contiene el analito y varias impurezas conocidas, o una mezcla específica de estándares de referencia.
Ejecute la solución de prueba de idoneidad del sistema en las condiciones analíticas de rutina.
Evaluar los parámetros clave de idoneidad del sistema, a menudo a los que se hace referencia directamente desde las farmacopeas o el método analítico.:
Eficiencia de la columna: Calcular el número de placa teórico.
Resolución: Examine la resolución entre pares de picos críticos.
factor de cola: Compruebe la simetría del pico principal.
Repetibilidad del tiempo de retención: Múltiples inyecciones para evaluar la RSD de los tiempos de retención.
Repetibilidad del área máxima: Múltiples inyecciones para evaluar la RSD de las áreas máximas.
Punto clave: PQ no es un evento único. Se debe volver a realizar después de cualquier reparación importante o reemplazo de componentes críticos, y se recomienda realizarlo periódicamente (por ejemplo, trimestral o semestralmente) como parte de la verificación continua.
Salidas: Protocolo e informe de prueba PQ, incluidos cromatogramas y resultados de cálculo de idoneidad del sistema.
III. Ciclo de verificación y reverificación
Se requiere una nueva verificación en las siguientes situaciones:
Reverificación periódica: Con base en la evaluación de riesgos, establezca un cronograma de PQ periódico (por ejemplo, cada 6 o 12 meses).
Después de la reubicación o movimiento del instrumento.
Después de reparaciones importantes o reemplazo de componentes clave (p. ej., cabezal de bomba, celda de flujo del detector, actualización de la placa base, etc.).
Cuando ocurren fallas sistemáticas y se sospecha el desempeño del instrumento.
La verificación por HPLC es un proceso científico riguroso y documentado. Garantiza que los datos analíticos cumplan con los principios ALCOA+ (Atribuible, Legible, Contemporáneo, Original, Preciso, además de Completo, Consistente, Duradero y Disponible).
Preguntas frecuentes sobre la verificación HPLC
P1: ¿Quién debe realizar la verificación del instrumento: el proveedor o nuestro propio laboratorio?
A: Generalmente es un esfuerzo colaborativo.
Proveedor: Generalmente proporciona servicios IQ/OQ estándar (como parte del servicio de instalación), con herramientas profesionales, estándares de referencia y protocolos para completar de manera eficiente la verificación básica.
Laboratorio/Usuario: El usuario es el responsable de la verificación. El usuario debe:
Definir los requisitos del usuario.
Revisar y aprobar los protocolos e informes de validación proporcionados por el proveedor.
Realice o participe en PQ, ya que PQ debe simular los métodos analíticos reales del usuario.
Ser responsable de la verificación y reverificación continua y continua.
Punto clave: Es un error pensar que “una vez que el proveedor lo ha hecho, la verificación está completa”. El laboratorio debe comprender y controlar todo el proceso de verificación y sus resultados.
P2: ¿Cómo deberían definirse los criterios de aceptación para la verificación? ¿Podemos utilizar directamente los criterios del fabricante?
A: Sí, pero deben ser evaluados y aprobados.
Criterios predeterminados: En ausencia de requisitos reglamentarios o basados en métodos específicos, es común y aceptable utilizar los criterios proporcionados por el fabricante en los protocolos OQ/PQ, que se basan en las especificaciones de diseño del instrumento. Estos criterios suelen ser más estrictos que los requisitos reglamentarios.
Criterios más estrictos: Si el método analítico tiene requisitos especiales para un parámetro particular (por ejemplo, precisión de inyección extremadamente baja), es posible que deba establecer criterios de aceptación que sean más estrictos que los del fabricante.
Referencia regulatoria: Para PQ, los criterios de aceptación a menudo se toman directamente de los requisitos de idoneidad del sistema especificados en las farmacopeas (por ejemplo, USP, EP) o métodos internos.
Principio fundamental: Todos los criterios de aceptación deben estar claramente definidos y aprobados en el protocolo antes de que comience la verificación.
P3: ¿Con qué frecuencia se debe realizar una nueva verificación? ¿Cómo se debe determinar la frecuencia PQ?
A: No existe una regla única para todos; debe basarse en una evaluación de riesgos.
Reverificación basada en activadores:
Después de reparaciones importantes o reemplazo de componentes clave (obligatorio).
Después de la reubicación del instrumento (obligatorio).
Cuando las desviaciones sistemáticas en los datos sugieren posibles problemas de rendimiento del instrumento.
Reverificación periódica:
Generalmente se recomienda realizar una PQ completa cada 6 o 12 meses.
La frecuencia depende de: frecuencia de uso del instrumento, criticidad de las tareas analíticas, estabilidad histórica del rendimiento del instrumento, etc. Un instrumento de control de calidad de alto rendimiento utilizado diariamente debe tener una frecuencia de PQ más alta que un instrumento de investigación utilizado ocasionalmente.
