Razones para aumentar la presión en HPLC

1. Problemas con la columna: obstrucción de la columna (retención de muestras, acumulación de partículas): no filtrar las muestras a través de membranas de 0,22 μm, eliminar impurezas en la fase móvil o la falta de derivatización de muestras de moléculas grandes que contienen proteínas o polisacáridos puede provocar una acumulación de impurezas dentro de la columna, lo que resulta en un aumento progresivo de la presión de la columna. La obstrucción crónica puede causar una disminución en la eficiencia de la columna, lo que podría provocar una pérdida irreversible de rendimiento.

Colapso del lecho de la columna o degradación del material de relleno: el uso inverso de la columna cromatográfica o los cambios bruscos de presión (p. ej., parada repentina de la bomba o cambio rápido de la fase móvil) pueden causar el colapso del lecho de la columna; La selección inadecuada de la fase móvil (p. ej., uso de solventes incompatibles con el material de empaque) o condiciones de almacenamiento inadecuadas (p. ej., humedad o temperatura alta) pueden provocar la degradación del material de empaque. Ambos escenarios pueden resultar en un aumento de la presión de la columna.

La baja temperatura de la columna aumenta la viscosidad de la fase móvil: cuando la temperatura de la columna está por debajo del valor establecido o la temperatura fluctúa debido a un mal funcionamiento de la cámara de temperatura de la columna, la viscosidad de la fase móvil aumenta, lo que aumenta la resistencia y la presión en la columna cromatográfica. Esto también afecta la eficiencia de la separación, lo que resulta en un pico de cola y una desviación del tiempo de retención.

2. Obstrucción del filtro en línea en el sistema de filtración: El filtro en línea es un componente crítico para proteger la columna cromatográfica. El uso prolongado provoca la retención de impurezas, que pueden obstruir la membrana del filtro y provocar un aumento sostenido de la presión en el sistema. Es necesario realizar un desmontaje, limpieza o reemplazo periódicos.

Saturación de la precolumna o precolumna: si la precolumna/precolumna no se reemplaza durante un período prolongado, las impurezas retenidas alcanzan la saturación, dejándola incapaz de realizar una mayor filtración. Esto no sólo conduce a un aumento de la presión, sino que también provoca la pérdida de su función protectora, permitiendo que entren impurezas en la columna analítica.

La retención de muestras y la cristalización de la fase móvil pueden bloquear la junta de sellado del rotor del inyector, lo que genera un aumento de presión en el puerto de inyección y afecta la precisión de la inyección de la muestra, lo que puede provocar picos fantasma y una repetibilidad deficiente de las áreas de los picos.

3. Condiciones operativas: Ajustes de caudal excesivos: cuando el caudal excede el rango de tolerancia máximo de la columna cromatográfica o excede el caudal de salida nominal de la bomba del instrumento, puede causar un aumento brusco en la presión del sistema. El funcionamiento prolongado a caudales elevados también puede dañar la columna cromatográfica y los componentes de la bomba.

Cambios en la viscosidad del solvente durante la elución en gradiente: durante la elución en gradiente, las variaciones en la proporción de mezcla de diferentes solventes pueden causar cambios abruptos en la viscosidad de la fase móvil (por ejemplo, el sistema metanol-agua alcanza la viscosidad máxima en una proporción determinada). No anticipar y ajustar el programa de gradiente con antelación puede provocar un aumento repentino de presión.

Sobrecarga de muestra o matriz de muestra compleja: la carga excesiva de la muestra o la presencia de altos niveles de impurezas que interfieren en la matriz de la muestra pueden aumentar la carga sobre la columna cromatográfica, lo que genera una presión elevada de la columna, así como problemas como el ensanchamiento y la división de los picos.