El cromatógrafo líquido ofrece un rendimiento estable y una alta sensibilidad de detección, ampliamente utilizado en investigación, protección ambiental, productos farmacéuticos, alimentos, productos químicos y otros campos. A continuación se muestra el procedimiento operativo estándar y los puntos de uso principales.
Operación: Preparar fase móvil y metanol puro; filtrar a través de una membrana de 0,45 µm/0,22 µm; desgasificar por sonicación durante 20 minutos.
Puntos clave: La fase móvil debe filtrarse y desgasificarse (para evitar obstrucciones de la columna, daños a la bomba e inestabilidad de la línea base). Prepare soluciones tampón acuosas frescas para evitar el crecimiento y el deterioro bacterianos.
Operación: Encienda la bomba; fije el límite superior de presión en 40 MPa (400 bar). Primero lave la bomba con metanol puro a 1 ml/min durante 10 a 20 minutos y luego cambie a la fase móvil. Encienda el detector, establezca la longitud de onda y ponga a cero la línea de base.
Puntos clave: Si el método anterior utilizó un tampón, siempre enjuague la ruta de flujo con metanol antes de comenzar el experimento (para evitar la precipitación de sal y daños a la bomba). No aumente arbitrariamente el límite de presión.
Operación: Inicie la estación de trabajo, confirme la comunicación, espere una fluctuación de la línea base <±0,1 mV y un nivel bajo de ruido antes de la inyección.
Puntos clave: No inyecte si la línea base es inestable (sistema no equilibrado, burbujas de aire o contaminación); de lo contrario, se pueden producir variaciones en el tiempo de retención y resultados inexactos.
Operación: Extraiga la muestra con una microjeringa (3 a 5 veces el volumen del asa). Gire la válvula de inyección a la posición "CARGAR", inyecte la muestra, luego gire a la posición "INJECT" para iniciar la adquisición de datos.
Puntos clave: Inyecte rápidamente para evitar la difusión de la muestra; Lave la aguja con disolvente (metanol/isopropanol) al menos 5 veces antes y después de la inyección para evitar la contaminación cruzada.
Operación: Establezca parámetros cuantitativos (método de estándar externo – área de pico – calibración de punto único/multipunto). Prepare una tabla de componentes (nombre, tiempo de retención, concentración). Seleccione archivos estándar para generar la curva, asegurando que R² > 0,99 (idealmente > 0,999).
Puntos clave: Las concentraciones estándar deben ser precisas y cubrir el rango de concentración de muestra esperado. Verifique periódicamente la curva; recalibrar si se produce una desviación.
Operación: Después de la inyección, espere a que se eluyan todos los picos. Se pueden realizar inyecciones secuenciales.
Puntos clave: Controle la presión: un aumento repentino puede indicar una columna obstruida; una caída o fluctuación repentina puede indicar una fuga o burbujas de aire. Haga una pausa y solucione problemas si se produce una anomalía.
Operación: Ingrese al módulo de reprocesamiento, abra el archivo de datos y haga clic en "Recalcular" para generar el informe.
Operación:
Apague el detector.
Lavar el sistema según el tipo de fase móvil.:
Fase móvil acuosa/tampón: Primero enjuague con 10% de metanol/agua durante 30 minutos, luego con metanol puro durante 20 minutos.
Fase móvil orgánica pura: Enjuague directamente con metanol; Detenga la bomba y apague la alimentación; Lavar la válvula de inyección.
Puntos clave: Nunca deje buffer en el sistema durante la noche; esto extiende la vida útil de la columna y de la bomba.
