En el análisis experimental diario, el cromatógrafo líquido de alto rendimiento (HPLC) es un "socio principal" para muchos operadores de laboratorio. Puede manejar muestras no volátiles y térmicamente inestables. Ya sea para separar trazas de componentes en mezclas complejas o preservar la actividad de sustancias bioquímicas, su alta resolución y alta sensibilidad son indispensables. Sin embargo, muchas veces nos centramos en la preparación de muestras y la composición de la fase móvil, pero pasamos por alto cambios sutiles en el entorno circundante, cambios que silenciosamente pueden provocar desviaciones de los datos, mala repetibilidad o incluso fallas del instrumento. A continuación, basándose en escenarios operativos cotidianos, analizamos cómo los factores ambientales afectan al HPLC y a qué detalles debe prestar atención, lo que le ayudará a evitar problemas ocultos y obtener resultados más fiables.
La HPLC es sensible a la temperatura en cada paso del análisis: la viscosidad de la fase móvil cambia con la temperatura, las características de retención de la columna se ven afectadas e incluso la respuesta del detector puede "desviarse". El resultado final son cambios en el tiempo de retención, picos más amplios e incluso la imposibilidad de separar los picos objetivo.
Detalles a tener en cuenta durante la operación
Mantenga estable la temperatura ambiente; evite cambios repentinos. Los frecuentes ciclos de encendido y apagado de los acondicionadores de aire en verano o la proximidad a la calefacción en invierno pueden provocar una desviación de la línea base. Coloque el instrumento lejos de puertas, ventanas y rejillas de ventilación del aire acondicionado. Controle la temperatura del laboratorio entre 20 °C y 30 °C, con fluctuaciones no superiores a 2-3 °C por día. Si la temperatura ambiente en verano supera los 30 °C, recuerda comprobar previamente la fase móvil porque las altas temperaturas pueden generar burbujas. Puede sonicar la fase móvil durante unos minutos o dejar que se equilibre en el laboratorio durante una hora antes de usarla para evitar una presión inestable de la bomba.
Estabilizar la temperatura del horno de columna. Calibre la temperatura del horno de columna antes de cada ejecución. Por ejemplo, configúrelo a 30 °C y espere 10 minutos para ver si la pantalla real es estable. Si el horno de columna está fuera de control, el coeficiente de partición cambia y la resolución se ve definitivamente afectada. Una vez, un colega se encontró con una falla en el ventilador de un horno de columna que pasó desapercibida; como resultado, el tiempo de retención de la misma muestra inyectada repetidamente difería en 2 minutos. Sólo más tarde se descubrió que la temperatura no se había estabilizado.
Los componentes ópticos de un HPLC (por ejemplo, la lámpara de deuterio de un detector UV, la celda de flujo) y los circuitos electrónicos son particularmente sensibles a la humedad y la suciedad. La alta humedad puede provocar que las piezas ópticas se enmohezcan y el polvo puede bloquear los tubos, lo que provoca una disminución de la sensibilidad o un aumento vertiginoso de la presión de la bomba.
Acciones diarias a tomar
Controle la humedad con cuidado. Mantenga la humedad del laboratorio preferiblemente por debajo del 60%. Durante la temporada de lluvias, utilice un deshumidificador. En un laboratorio, la humedad superó el 70%, lo que provocó que se formara una niebla en la pared interior de la celda de flujo del detector UV; El ruido inicial aumentó y se necesitaron varios ciclos de limpieza para restaurar el rendimiento. Además, cubra el instrumento con una cubierta antipolvo cuando no esté en uso y limpie la carcasa exterior una vez a la semana (especialmente alrededor del puerto de inyección) para evitar que entren residuos de muestra o polvo.
Ventile los gases nocivos con prontitud. El metanol y el acetonitrilo de las fases móviles se evaporan y producen vapores corrosivos. Con el tiempo, estos pueden corroer los sellos y las tuberías de la bomba. Por lo tanto, manipule siempre las fases móviles dentro de una campana extractora cuando las prepare o cambie. Después de un experimento, no apague la campana extractora inmediatamente; déjelo funcionar durante 10 minutos más para eliminar los vapores residuales. Si el laboratorio no tiene campana extractora, abra las ventanas durante al menos 30 minutos para evitar que queden gases nocivos en la habitación.
La bomba de suministro de disolvente necesita un entorno estable para suministrar líquido con precisión y las señales del detector también son susceptibles a interferencias. Si el instrumento se coloca cerca de una centrífuga, un compresor de aire acondicionado o cerca de un ascensor o un motor de alta potencia, la vibración puede causar fluctuaciones en la línea base y la interferencia electromagnética puede hacer que las señales "salten".
Consideraciones de ubicación y suministro de energía.
Utilice un banco estable y exclusivo. No coloque el HPLC en el mismo banco que una centrífuga o un agitador. Una vez, un colega colocó una centrífuga junto a una HPLC por conveniencia; Durante la centrifugación, aparecieron picos espurios en la línea base. Después de alejar la centrífuga, la línea base se volvió suave inmediatamente. El banco debe estar fijo; no utilice un carro móvil, ya que una ligera sacudida puede afectar la precisión del bombeo.
Utilice una fuente de alimentación dedicada. Equipe el HPLC con un estabilizador de voltaje y evite compartir una toma de corriente con otros equipos de alta potencia (por ejemplo, placas calientes, hornos de vacío). En un laboratorio, el voltaje inestable provocó que el caudal de la bomba fluctuara, lo que provocó una mala repetibilidad del área máxima. El problema se solucionó tras instalar un estabilizador de voltaje. Además, asegúrese de que el instrumento esté correctamente conectado a tierra para evitar que la interferencia electromagnética afecte las señales del detector.
Los detectores de UV y fluorescencia son muy sensibles a la luz. La luz intensa aumenta el ruido de base. El flujo de aire directo sobre el instrumento provoca cambios de temperatura locales, lo que hace que el tiempo de retención sea irreproducible.
Posicionamiento correcto
Evite la luz solar directa. Instale persianas en las ventanas del laboratorio, especialmente las orientadas al sur. En verano, la luz solar intensa que incide directamente sobre el detector provocará fluctuaciones irregulares en la línea de base. Además, trate de no colocar la pantalla del instrumento frente a una fuente de luz, ya que el deslumbramiento puede provocar que se presionen botones accidentalmente.
No permita que el flujo de aire sople directamente sobre el instrumento. Coloque los respiraderos del laboratorio y las salidas de aire acondicionado lejos del HPLC. En un caso, había una salida de aire directamente encima del instrumento; cuando la ventilación estaba encendida, el flujo de aire golpeaba el horno de columna, provocando fluctuaciones de temperatura y mala repetibilidad del tiempo de retención. El problema se resolvió redirigiendo el respiradero. Si no se puede mover la ventilación, instale un deflector encima del instrumento para desviar el flujo de aire.
Al realizar análisis de trazas, las partículas en el aire y los compuestos orgánicos volátiles pueden convertirse en contaminantes. Las partículas pueden bloquear la aguja de inyección o contaminar la fase móvil; La columna puede absorber compuestos orgánicos volátiles, lo que afecta los resultados de la detección.
Obligaciones de la gestión diaria
Proteja las fases móviles y las muestras de la contaminación. Filtrar las fases móviles a través de membranas de 0,22 µm; También filtre las muestras (a menos que sean soluciones puras libres de partículas). No reutilice los filtros para evitar la contaminación cruzada. Para fases móviles que se oxidan fácilmente (p. ej., tetrahidrofurano), purgue con nitrógeno antes de cada uso y selle y almacene las sobras en el refrigerador. No permita el contacto prolongado con el aire, que puede degradar la fase móvil y afectar la separación.
Deje espacio alrededor del instrumento. Mantenga un espacio libre de al menos 10 cm a los lados y en la parte trasera del HPLC para la disipación del calor y el mantenimiento. No apile botellas de reactivos ni cajas de muestras junto al instrumento; podrían volcarse fácilmente y bloquear las aberturas de ventilación, lo que provocaría un aumento de la temperatura interna. Limpie el filtro del aire acondicionado una vez a la semana para evitar que entre polvo en el instrumento, donde podría bloquear los tubos o afectar los circuitos electrónicos.
Recordatorio final: Tómese dos minutos antes de cada arranque para comprobar el entorno: toque el horno de columna para ver si funciona correctamente, observe la lectura del higrómetro y escuche si hay algún ruido anormal de la bomba. Estos hábitos aparentemente simples pueden ayudarle a evitar muchos problemas innecesarios y a mantener su HPLC en buen estado.
