El objetivo principal del apagado a corto plazo (por ejemplo, fines de semana) es evitar la cristalización de residuos y el bloqueo de las tuberías, al mismo tiempo que se garantiza la estabilidad del sistema para un reinicio rápido después de las vacaciones.
Eliminar fases móviles dañinas: Si el sistema contiene sales tampón, enjuague bien con agua pura (o 5% de metanol en agua) para evitar la cristalización de la sal. Si contiene disolventes propensos a la descomposición, como cloroformo, elimínelos también por completo.
Reemplazo de tubos: Después de la limpieza, lave todo el sistema (incluida la bomba, la columna y la celda del detector) con metanol/agua 60/40 durante aproximadamente 30 minutos para garantizar que el tubo se almacene en un disolvente compatible con la columna.
Después del lavado, apague secuencialmente la bomba, el detector, el muestreador automático y el horno de columna. Cierre la estación de trabajo de cromatografía y la computadora. Cubra con una cubierta antipolvo y apague el regulador de voltaje y la fuente de alimentación principal del laboratorio.
El cierre a largo plazo (por ejemplo, el Festival de Primavera o los días festivos del Día Nacional) requiere un mantenimiento más exhaustivo para evitar el crecimiento microbiano en las tuberías, daños a los componentes y degradación del rendimiento del sistema.
Este es el paso más crítico de todo el proceso. El protocolo de limpieza depende del tipo de fase móvil utilizada por última vez.
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Tipo de fase móvil |
Procedimiento de limpieza |
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Fase orgánica pura (p. ej., metanol, acetonitrilo) |
Lave el sistema directamente con metanol al 100 % durante 40 a 60 minutos. |
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Sales tampón (p. ej., fosfatos, acetato de amonio) |
Paso 1: Enjuague con 95 % de agua + 5 % de metanol durante 80 a 100 minutos para eliminar completamente las sales. Paso 2: Enjuague con metanol al 100 % durante 40 minutos. |
Notas importantes:
Al limpiar la columna, no se recomienda utilizar agua 100% pura; agregar un 5% de metanol evita que la fase estacionaria "colapse"."
El mismo principio se aplica a las válvulas de inyección manual. Asegúrese de que la solución de limpieza pase por las posiciones "Cargar" e "Inyectar" y nunca deje la válvula en la posición intermedia.
Principio final: Asegúrese de que todos los tubos estén llenos y almacenados en 100% metanol. Para las bombas cuaternarias, todos los tubos del canal deben almacenarse en disolvente orgánico para evitar el crecimiento y la obstrucción microbiana.
Después de la limpieza, pare la bomba en la estación de trabajo. Apague secuencialmente el detector, la bomba y el horno de columna. Cierre la estación de trabajo y la computadora y cúbralas con una cubierta antipolvo. Apague el regulador de voltaje y desenchufe el cable de alimentación del instrumento para asegurar una desconexión completa de la alimentación y evitar que los ventiladores de algunos módulos sigan funcionando. Si es necesario retirar la columna, selle herméticamente ambos extremos con tapones para evitar que el lecho se seque. Haga una copia de seguridad de los datos importantes en la estación de trabajo con antelación. Compruebe y vacíe la botella de residuos. Cerrar puertas, ventanas y suministros de agua, electricidad y gas del laboratorio.
El inicio adecuado después de las vacaciones afecta directamente la precisión analítica del HPLC y es una preocupación clave para los analistas que regresan al trabajo.
1) Inspección previa al inicio: elimine los problemas de apariencia y conexión
Primero, verifique que el instrumento parezca intacto y que todas las conexiones de los tubos estén seguras. Si la columna estuvo almacenada por un período prolongado, vuelva a instalarla, asegurándose de que los accesorios estén sellados sin fugas. Verifique que la temperatura y la humedad del laboratorio cumplan con los requisitos operativos del instrumento para evitar la inestabilidad del arranque causada por condiciones ambientales deficientes.
2) Arranque gradual y lavado del sistema: evite daños a los componentes
Encienda en el siguiente orden: fuente de alimentación → horno de columna → bomba → detector. Aumente gradualmente el caudal de la bomba de bajo a alto (caudal inicial recomendado de 0,2 ml/min), lave el tubo y la columna con disolventes adecuados para eliminar las burbujas de aire. Si utiliza sales tampón en la fase móvil, primero enjuague con 5 % a 10 % de metanol/acetonitrilo en agua antes de realizar la transición a la fase móvil objetivo para evitar la precipitación de sal.
3) Verificación del rendimiento: garantizar la precisión de los datos
Una vez que el sistema se haya estabilizado, inyecte una muestra estándar y verifique que el tiempo de retención, el área del pico, la resolución y otros parámetros sean consistentes con los valores previos a las vacaciones. Sólo después de confirmar que no hay anomalías en el rendimiento se deben comenzar los experimentos formales. Si aparecen problemas como distorsión máxima o presión anormal, solucione de inmediato los problemas de tuberías bloqueadas o contaminación de la columna.
Control ambiental: Para los instrumentos que no se utilizan durante períodos prolongados, enciéndalos regularmente (p. ej., 1 o 2 veces por semana) para evitar la acumulación de humedad y mantener la disponibilidad operativa.
Gestión de personal: Si se requiere el uso de instrumentos durante las vacaciones, es necesaria la solicitud previa y la aprobación de la gerencia.
Conciencia de seguridad: Antes de salir del laboratorio, confirme que todos los suministros de agua, electricidad y gas estén cerrados y que las puertas y ventanas estén bien cerradas.
P1: ¿Se puede dejar el HPLC en espera durante los días festivos?
R: No se recomienda el modo de espera prolongado. El modo de espera prolongado no solo consume electricidad sino que también puede causar obstrucciones en las tuberías o daños a los componentes debido a fluctuaciones de presión o degradación de la fase móvil. Para vacaciones cortas (hasta 3 días), la bomba se puede mantener a un caudal bajo para mantener una presión baja, siempre que la fase móvil sea estable. Para vacaciones superiores a 3 días se recomienda un apagado total con un mantenimiento adecuado.
P2: ¿Qué pasa si nos olvidamos de lavar la columna antes del apagado? ¿Cómo debemos afrontarlo después de las vacaciones?
R: Al iniciar después de las vacaciones, primero lave la columna a un caudal bajo con un disolvente compatible (p. ej., metanol para columnas de fase reversa) mientras controla los cambios de presión. Si la presión es demasiado alta, aumente gradualmente el caudal o cambie a un disolvente de lavado diferente. Si la presión no se recupera, puede ser necesario regenerar o reemplazar la columna.
P3: ¿Qué pasa si hay un corte de energía durante las vacaciones?
R: Prepare las unidades UPS con anticipación para proporcionar energía de emergencia a equipos críticos. Después de un corte de energía, una vez que se restablezca la energía, siga el procedimiento de inicio posterior a las vacaciones. Concéntrese en revisar los tubos para detectar fugas causadas por cambios repentinos de presión y asegúrese de que la columna no se haya visto afectada por la humedad.
P4: Después de instalar una columna almacenada durante mucho tiempo después de unas vacaciones, la presión es anormalmente alta. ¿Cómo se puede resolver esto?
R: Primero, verifique que no haya burbujas de aire ni obstrucciones en las conexiones de los tubos. Luego enjuague la columna a bajo caudal con el disolvente de almacenamiento durante 30 minutos. Si la presión permanece alta, se puede realizar un retrolavado de la columna (si el fabricante de la columna lo admite) o reemplazar la columna protectora.
