En el laboratorio, una línea de base estable es la base para un análisis exitoso de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), y la precisión de sus datos depende completamente de ello.
La línea de base puede estar llena de picos (un ruido alto que le produce dolor de cabeza) o puede desplazarse lentamente hacia arriba o hacia abajo. Estos problemas no sólo provocan una mala repetibilidad de los datos, sino que también hacen que los resultados sean inutilizables después de horas de trabajo. Elite Technology brinda soporte técnico práctico para ayudarlo a resolver estos problemas y ha compilado soluciones de problemas básicos comunes para usted.
I. Manifestaciones de inestabilidad basal
El ruido de referencia alto es fácil de detectar: la línea suave de repente se cubre con pequeños picos, lo que imposibilita la integración máxima, reduce la sensibilidad del instrumento y probablemente hace que los componentes de baja concentración sean indetectables.
La desviación de la línea de base también es común: la línea de base sube lentamente o se desliza hacia abajo. El problema es que puede enmascarar parcial o incluso completamente el pico objetivo, haciendo imposible distinguir los puntos inicial y final del pico en el análisis cuantitativo, dejándolo perdido.
También se producen fluctuaciones periódicas, por ejemplo pulsaciones debido al funcionamiento de la bomba o variaciones regulares causadas por cambios de temperatura ambiente. Estos tienen un impacto particularmente fuerte en la detección de picos pequeños, lo que fácilmente conduce a interpretaciones erróneas o incluso a pasar por alto picos tan pequeños.
II. Causas comunes y soluciones
La fase móvil es como la “sangre” del instrumento; cuando tiene problemas, la línea base reacciona inmediatamente. Si la fase móvil no se desgasifica adecuadamente, las burbujas ingresan a la celda del detector y hacen que la línea de base fluctúe, porque las burbujas en la celda de flujo interfieren con la transmisión y refracción de la luz. Si la pureza del solvente es insuficiente, las impurezas del solvente ingresan al sistema de detección con la fase móvil, interfieren con la señal y hacen que la línea base sea ruidosa. Además, si se almacena una solución salina tampón durante demasiado tiempo, se pueden formar precipitados y el pH puede volverse inestable, lo que conduce a una inestabilidad inicial.
Resolver los problemas de la fase móvil no es difícil. En primer lugar, la desgasificación debe realizarse bien. El tratamiento ultrasónico es común en los laboratorios; Si las condiciones lo permiten, es más fiable utilizar un desgasificador en línea, ya que elimina las burbujas continuamente. En segundo lugar, utilice siempre disolventes de calidad HPLC: contienen menos impurezas y reducen las interferencias. Al dispensar disolventes, tenga cuidado y tape los frascos de reactivo lo antes posible para evitar la contaminación. Las fases móviles tamponadas se preparan mejor frescas y se utilizan poco después de su preparación; no los almacene por mucho tiempo para evitar precipitaciones o cambios de pH.
El detector es el componente clave para la recepción de señales; si su condición es mala, la línea base seguramente se verá afectada. Las lámparas de deuterio o tungsteno envejecen con el uso; su energía se vuelve insuficiente y la luz emitida se vuelve inestable, lo que hace que la señal detectada fluctúe y la línea de base se vuelva inestable. La celda de flujo también puede causar problemas: si está sucia o contiene burbujas residuales, la propagación de la luz se ve afectada, lo que genera señales anormales, ruido de referencia o deriva.
Para solucionar los problemas del detector, primero verifique la energía de la lámpara. Normalmente, las lámparas de deuterio tienen una vida útil de 1000 a 2000 horas. Cuando se acerque el final de su vida útil o cuando la energía sea obviamente baja, reemplace la lámpara lo antes posible. Si la celda de flujo está sucia, límpiela ultrasónicamente con metanol o ácido nítrico diluido para eliminar contaminantes y burbujas, manteniéndola limpia.
La bomba es la potencia que impulsa la fase móvil; si tiene problemas, todo el sistema se vuelve inestable. Los sellos desgastados de la bomba pueden causar fugas o fluctuaciones de presión, lo que resulta en un caudal de fase móvil inestable y una línea base inestable. Una válvula de retención obstruida también es problemática: hace que el caudal sea errático, el sistema no puede funcionar sin problemas y la línea base es inevitablemente inestable.
Para resolver los problemas de las bombas y del sistema, el mantenimiento regular es clave. Cuando encuentre desgaste en el sello de la bomba, reemplácelo de inmediato; esto es esencial para el funcionamiento adecuado de la bomba. Si la válvula de retención está obstruida, sumérjala en isopropanol durante unos 10 minutos y luego límpiela con ultrasonido; Esto generalmente elimina la obstrucción y restablece el funcionamiento normal.
La columna es el núcleo para separar los componentes; si está en mal estado también pueden surgir problemas de base. Con el uso prolongado, los contaminantes se acumulan en la columna, la eficiencia disminuye y pueden aparecer picos anormales o fluctuaciones iniciales durante el análisis. Además, las fluctuaciones de temperatura de la columna tienen un efecto: los cambios de temperatura alteran la distribución de los componentes entre las fases estacionaria y móvil, afectando los tiempos de retención y, en consecuencia, provocando una desviación de la línea base.
Para mantener la columna, lávela o regenere periódicamente; consulte el manual de la columna para conocer los procedimientos específicos para eliminar contaminantes. Al mismo tiempo, utilice un horno de columna para estabilizar la temperatura de la columna y reducir las fluctuaciones de temperatura; esto estabilizará considerablemente la línea de base.
No se pueden ignorar las interferencias del entorno externo. El voltaje inestable del laboratorio afecta la fuente de alimentación del detector, provocando fluctuaciones de la señal y un aumento del ruido de referencia. La interferencia electromagnética de equipos cercanos, como centrífugas y acondicionadores de aire, también puede alterar el detector y hacer que la línea base sea inestable.
Para hacer frente a las interferencias ambientales, primero conecte el instrumento a una fuente de alimentación regulada para garantizar una alimentación estable. En segundo lugar, coloque el instrumento lejos de fuentes de interferencias electromagnéticas y asegúrese de una conexión a tierra adecuada para reducir el impacto de las interferencias electromagnéticas.
III. Recomendaciones de mantenimiento diario (medidas preventivas)
Un buen mantenimiento diario puede reducir en gran medida los problemas de inestabilidad inicial.
Gestión de fase móvil: Insista en utilizar disolventes de grado HPLC para evitar interferencias causadas por problemas de pureza. Antes de cada uso, asegúrese de una desgasificación exhaustiva; ya sea mediante sonicación o desgasificación en línea, asegúrese de que el resultado sea efectivo.
Mantenimiento de detectores: Mantenga un registro de las horas de uso de la lámpara de deuterio. Cuando se acerque el final de su vida útil, prepare un reemplazo con anticipación para que no se sorprenda cuando la energía sea insuficiente. Limpie la celda de flujo con regularidad para mantenerla limpia y garantizar señales de detección precisas.
Comprobaciones de estabilidad del sistema: Calibre periódicamente el caudal de la bomba para garantizar un suministro estable de la fase móvil. Inspeccione con frecuencia la tubería en busca de fugas; Si se encuentran fugas, trátelas rápidamente para evitar afectar la presión y el caudal del sistema.
Mantenimiento de columnas: Utilice una columna protectora para reducir la entrada de contaminantes en la columna analítica y prolongar su vida útil. Cuando la columna no se vaya a utilizar durante un período prolongado, guárdela adecuadamente en un disolvente orgánico puro para evitar el deterioro del material de embalaje.
