Determinación simultánea de ácido benzoico, ácido sórbico, sacarina sódica y acesulfamo-K en alimentos

• analito: Ácido benzoico, Ácido sórbico, Sacarina sódica, Acesulfamo-K
• Sistema: EClassical 3200 HPLC Sistema
• Columna: Supersil AQ-C18 (5μm, 4,6×250mm)
• Destacar: Detección simultánea de cuatro aditivos alimentarios con alta sensibilidad.

Los aditivos alimentarios desempeñan un papel crucial en la conservación de la calidad, la seguridad y el sabor de los alimentos. Entre ellos, se utilizan ampliamente conservantes como el ácido benzoico y el ácido sórbico, y edulcorantes como la sacarina sódica y el acesulfamo-K. Para garantizar su uso "razonable" y "moderado", son esenciales métodos de detección fiables. La empresa Elite presenta una solución basada en HPLC para la determinación simultánea de estos cuatro aditivos. Este método no sólo permite el análisis simultáneo sino que también aborda el problema de la corta vida útil que suele encontrarse con las columnas C18 convencionales.

Estándares: ácido benzoico (1000 μg/mL), ácido sórbico (1000 μg/mL), sacarina sódica (1000 μg/mL), acesulfamo-K (>97,0%)

reactivos: metanol (grado HPLC), acetato de amonio (grado analítico), agua desionizada (18,2 MΩ·cm)

Otros materiales: solución de ferrocianuro de potasio, solución de acetato de zinc, n-hexano (para muestras con alto contenido de grasa), solución de amoníaco (1+99), etanol.

Solución madre estándar mixta (50 μg/ml): Pesar con precisión cantidades apropiadas de ácido benzoico, ácido sórbico, sacarina sódica y acesulfamo-K en un matraz aforado. Disolver y diluir a volumen con agua desionizada para lograr una concentración final de 50 μg/ml para cada uno. Mezclar bien, filtrar a través de una membrana de 0,45 μm y almacenar a 4°C.

Soluciones de trabajo: Diluya la solución madre con agua desionizada a las concentraciones deseadas según sea necesario.

Se describen tres tipos de pretratamiento de muestras según la matriz de muestras.:

Muestras generales (p. ej., bebidas, jugos de frutas):

Pese con precisión alrededor de 2 g (a 0,001 g) de muestra en un tubo de centrífuga de 50 ml. Añadir ~25 ml de agua, mezclar con vórtex y sonicar en un baño de agua a 50 °C durante 20 min. Enfriar a temperatura ambiente, agregar 2 ml de solución de ferrocianuro de potasio y 2 ml de solución de acetato de zinc, mezclar y centrifugar a 8000 r/min durante 5 min. Transferir la fase acuosa a un matraz aforado de 50 ml. Añadir 20 ml de agua al residuo, agitar, sonicar durante 5 minutos, centrifugar nuevamente y combinar los sobrenadantes. Diluir a volumen con agua, mezclar y filtrar a través de una membrana de 0,22 μm antes del análisis por HPLC. (Nota: para bebidas carbonatadas, vinos de frutas y licores destilados, se puede omitir el paso de precipitación de proteínas).

Muestras que contienen gomas (p. ej., gelatina, caramelo):

Pesar aproximadamente 2 g de muestra en un tubo de centrífuga, agregar ~25 ml de agua, agitar y calentar en un baño de agua a 70 °C para disolver. Luego sonicar a 50°C durante 20 min. Proceda con la precipitación de proteínas y la centrifugación como se describe para muestras generales.

Muestras ricas en grasas (p. ej., chocolate, crema, alimentos fritos):

Pesar aproximadamente 2 g de muestra en un tubo de centrífuga, agregar 10 ml de n-hexano y calentar en un baño de agua a 60 °C durante ~5 min agitando ocasionalmente para disolver la grasa. Añadir 25 ml de solución de amoníaco (1+99) y 1 ml de etanol, agitar y sonicar a 50 °C durante 20 min. Enfriar, agregar precipitantes de proteínas, centrifugar, desechar la fase orgánica y transferir la fase acuosa a un matraz volumétrico de 50 ml. Vuelva a extraer el residuo una vez más y combine las fases acuosas. Diluir a volumen y filtrar.

sistema HPLC: EClassical 3200 configurado con D3210 UV-Vis Detector, bomba de alta presión P3220, O3220 Column Oven, muestreador automático S3210, bandeja para botellas de solvente T3200, Kromstation CDS.

Columna Supersil AQ-C18 (5 μm, 4,6×250 mm)

Equipos de pretratamiento: Conjunto de filtro de disolvente, bomba de vacío de diafragma, limpiador ultrasónico, balanza electrónica de precisión (sensibilidad de 0,1 mg), centrífuga, matraces volumétricos, micropipetas, etc.

Columna: Supersil AQ-C18 (5 μm, 4,6×250 mm)

Fase móvil: Metanol/solución de acetato de amonio 0,02 mol/L = 5:95 (V/V)

Caudal: 1,0 ml/min

Detección: UV a 230 nm

Volumen de inyección: 10 μL

Temperatura de la columna: 30°C

Separación estándar

En la Figura 1 se muestra un cromatograma típico de una solución estándar mixta a 10,0 μg/ml. Los parámetros cromatográficos se resumen en la Tabla 1.

Fig.1 Cromatograma de una solución estándar mixta (5 μg/mL) de ácido benzoico, ácido sórbico, sacarina sódica y acesulfamo-K

Tabla 1. Parámetros cromatográficos

Límite de linealidad y detección

Las curvas de calibración se construyeron utilizando soluciones de trabajo estándar en concentraciones de 5, 10, 20, 30, 40, 50 y 100 μg/ml. Las ecuaciones de regresión lineal y los coeficientes de correlación se enumeran en la Tabla 2. Los límites de detección del instrumento (S/N=3) y los límites de cuantificación (S/N=10) se dan en la Tabla 3.

Tabla 2. Ecuaciones lineales y coeficientes de correlación

Tabla 3. Límites de detección y cuantificación

El método exhibe una linealidad excelente y límites de detección bajos, lo que lo hace adecuado para el control rutinario de estos aditivos en diversas matrices alimentarias.