El tartrato de tilosina es un antibiótico macrólido ampliamente utilizado en medicina veterinaria para el tratamiento de infecciones respiratorias y gastrointestinales. También se emplea como crecimiento promoter en el ganado. La determinación precisa del tartrato de tilosina es esencial para el control de calidad de las formulaciones farmacéuticas. Este informe presenta un método de HPLC para el análisis de tartrato de tilosina utilizando una columna SinoChrom ODS-BP con elución en gradiente y detección UV a 254 nm.
Estándares: Tartrato de tilosina (CAS 1405-54-5)
reactivos : agua desionizada (18,2 MΩ·cm), metanol (grado HPLC), acetonitrilo (grado HPLC), acetato de amonio (grado analítico), ácido acético (glacial, grado analítico). Otros disolventes y productos químicos necesarios para el pretratamiento de la muestra (p. ej., disolventes de extracción, membranas de filtración)
Preparación de solución estándar
Pesar con precisión unos 10 mg de estándar de tartrato de tilosina en un matraz volumétrico de 10 ml. Disolver en metanol, diluir a volumen con el mismo disolvente y mezclar bien. Filtrar a través de una membrana de 0,45 μm antes de la inyección.
Para las muestras de prueba, siga el mismo procedimiento que para la solución estándar: pese con precisión una cantidad adecuada de muestra (equivalente a aproximadamente 10 mg de tartrato de tilosina), disuelva en metanol, diluya a 10 ml y filtre a través de una membrana de 0,45 μm.
Sistema HPLC : EClassical 3200 equipado con bomba cuaternaria, detector UV-vis, muestreador automático, horno de columna, bandeja para botellas de solvente, Kromstation CDS.
Equipos de pretratamiento: balanza analítica (sensibilidad de 0,0001 g), limpiador ultrasónico, centrífuga, aparato de filtración de disolventes, filtros de membrana, pipetas, etc.
Columna: SinoChrom ODS-BP (5μm, 4,6×250 mm)
Fase Móvil : A: solución de acetato de amonio 0,01 mol/L (pH 3,0 ajustado con ácido acético); B: acetonitrilo, en gradiente (Tabla 1)
Tasa de flujo: 1,0 ml/min
Detección: UV a 254 nm
Inyección vol. : 20 µL
Temperatura de la columna.: 30°C
Tabla 1. Programa de gradiente
| Tiempo (minutos) | A% | B% |
|---|---|---|
| 0 | 60 | 40 |
| 5 | 60 | 40 |
| 10 | 50 | 50 |
| 20 | 40 | 60 |
| 30 | 30 | 50 |
| 30.1 | 60 | 40 |
| 40 | 60 | 40 |
En la Figura 1 se muestra un cromatograma representativo del tartrato de tilosina en las condiciones descritas (consulte el documento original). La forma del pico es satisfactoria y el tiempo de retención es reproducible. El programa de gradiente garantiza una separación adecuada del tartrato de tilosina de cualquier sustancia relacionada.
Fig.1. Parámetros del pico de ceftiofur – columna SinoPak BEH T-C18 (inyección 1.ª frente a 13.ª)
