Determinación por HPLC de rutina en hojas de morera

• analito: rutina
• Sistema: EClassical 3200 HPLC Sistema con detector de matriz de diodos (DAD)
• Columna: Hypersil ODS2 (5 μm, 4,6 × 150 mm)
• Destacar: Un método de HPLC fiable para el análisis rutinario de rutina en hojas de morera, con una buena forma de pico y que cumple los requisitos de la farmacopea.

La rutina, también conocida como rutósido o vitamina P, es un glucósido de flavonol natural ampliamente presente en las plantas. Exhibe diversas actividades farmacológicas que incluyen efectos antiinflamatorios, antioxidantes, antialérgicos y antivirales. En la medicina tradicional china, las hojas de morera son una fuente común de rutina. Según los métodos de la farmacopea, la separación cromatográfica adecuada y la forma del pico son esenciales para una cuantificación precisa. Este informe presenta un método de HPLC para la determinación de rutina en hojas de morera utilizando un sistema EClassical 3200, abordando cuestiones como los efectos de los disolventes y la selección de columnas para lograr un rendimiento máximo satisfactorio.

Estándares: Rutina (CAS 153-18-4)

reactivos : agua desionizada (18,2 MΩ · cm), metanol (grado HPLC), ácido fosfórico (AR), otros disolventes y productos químicos necesarios para el pretratamiento de la muestra (p. ej., disolventes de extracción, membranas de filtración)

Preparación de solución estándar

Aportado por el cliente (disolvente, metanol). Para evitar efectos de disolvente, el estándar se diluyó 5 veces con la composición de la fase móvil inicial (metanol/ácido fosfórico al 0,5 % = 30/70) antes de la inyección.

Todas las soluciones se filtran a través de una membrana de 0,45 μm antes de la inyección.

Aportado por el cliente (disolvente, metanol).

Sistema HPLC : EClassical 3200 equipado con bomba cuaternaria, DAD, autosampler, horno de columna, bandeja para botellas de solvente, Kromstation CDS.

Equipos de pretratamiento: balanza analítica (sensibilidad de 0,0001 g), limpiador ultrasónico, centrífuga, aparato de filtración de disolventes, filtros de membrana, pipetas, etc.

Columna:              Hypersil ODS2 (5 μm, 4,6 × 150 mm)

Fase Móvil :     A: Metanol, B: Solución acuosa de ácido fosfórico al 0,5%, en gradiente (Tabla 1).

Tasa de flujo:          1,0 ml/min

Detección:           UV a 358 nm

Inyección vol. : 10 µL

Temperatura de la columna.:   30°C

Tabla 1. Programa de gradiente

Separación estándar

La solución estándar de rutina (diluida 5 veces con fase móvil inicial) se analizó en las condiciones anteriores. En la Figura 1 se muestra un cromatograma representativo. El tiempo de retención fue de aproximadamente 14,356 min, con buena forma de pico. Los parámetros cromatográficos se resumen en la Tabla 2.

Fig. 1. Cromatograma de rutina estándar (dilución 5 veces)

Tabla 2. Parámetros cromatográficos del estándar de rutina (diluido 5 veces)

Efectos solventes

Cuando el estándar de rutina se disolvió en metanol puro y se inyectó sin dilución con fase móvil, se observó un frente de pico severo (factor de asimetría 0,730, número de placa 6476). La dilución de la muestra con la fase móvil inicial eliminó eficazmente el efecto disolvente y mejoró la simetría de los picos.

Análisis de muestras

La solución de muestra de hojas de morera se analizó en las mismas condiciones. El pico de rutina eluyó aproximadamente a los 14.380 min (Figura 2). Los parámetros cromatográficos se dan en la Tabla 3.

Fig. 2. Cromatograma de una muestra de hoja de morera, pico 1-rutina

Cuadro 3. Parámetros cromatográficos de rutina en muestra de hoja de morera