Determinación por HPLC de enrofloxacina y lactato de ciprofloxacina en medicamentos veterinarios

• analito: Enrofloxacina, lactato de ciprofloxacina
• Sistema: Sistema Agress 1100 o EClassical 3100 HPLC con detector UV
• Columna: Supersil ODS2 (5 µm, 4,6 × 150 mm)
• Destacar: Métodos HPLC confiables para el análisis de fluoroquinolonas en formulaciones de medicamentos veterinarios

Las fluoroquinolonas son una clase de antibióticos sintéticos ampliamente utilizados en ganadería y acuicultura para el tratamiento de infecciones bacterianas. Ejercen su efecto antibacteriano al inhibir las enzimas de replicación del ADN, como la ADN girasa y la topoisomerasa IV, y muestran actividad de amplio espectro contra bacterias Gram negativas y algunas Gram positivas. Debido a su uso extensivo, monitorear su concentración en las formulaciones de medicamentos veterinarios es esencial para el control de calidad y para prevenir residuos en alimentos de origen animal. La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) es una técnica convencional para el análisis de fluoroquinolonas, que normalmente emplea columnas C18 de fase reversa con detección de UV o fluorescencia. Este método ofrece alta sensibilidad, buena repetibilidad y cumplimiento de estándares nacionales como GB/T 20366-2006 y la Farmacopea Veterinaria China.

Estándar : Estándar de referencia de lactato de ciprofloxacina, estándar de referencia de enrofloxacina (utilizado como estándar interno)

reactivos: Solución de ácido fosfórico de 0,025 mol/L, acetonitrilo (grado HPLC), trietilamina (para ajuste de pH), solución de ácido fosfórico de 0,025 mol/L/acetonitrilo = 87:13 (v/v), ajustado a pH 3,0 con trietilamina (fase móvil)  

Solución madre de lactato de ciprofloxacina: Pesar con precisión unos 25 mg de estándar de referencia de lactato de ciprofloxacina en un matraz volumétrico de 100 ml. Disolver y diluir a volumen con fase móvil. Mezclar bien.

Solución de patrón interno de enrofloxacina: Pesar con precisión 25 mg de estándar de referencia de enrofloxacina en un matraz volumétrico de 100 ml. Disolver y diluir a volumen con fase móvil. Mezclar bien.

Solución de prueba: Pipetee con precisión 5 ml de solución madre de lactato de ciprofloxacina y 5 ml de solución estándar interna de enrofloxacina en un matraz aforado de 25 ml. Diluir a volumen con fase móvil y mezclar bien.

Para formulaciones de medicamentos veterinarios que contienen lactato de ciprofloxacina, prepare la solución de muestra siguiendo un procedimiento similar al de la preparación estándar, asegurándose de que la concentración final esté dentro del rango de calibración. Filtrar a través de una membrana de 0,45 μm antes de la inyección.

Sistema HPLC : Agress 1100 o EClassical 3100 equipado con detector UV-vis, bomba de alta presión, inyector manual (Rheodyne 7725i) o muestreador automático, horno de columna, Kromstation CDS.

Equipos de pretratamiento: Balanza analítica, matraces aforados, pipetas, aparatos de filtración por membrana, etc.

• Columna: Supersil ODS2 (5 µm, 4,6 × 250 mm)
• Fase Móvil: Solución de ácido fosfórico 0,025 mol/L/acetonitrilo = 87:13 (v/v), ajustado a pH 3,0 con trietilamina
• Tasa de flujo: 1,0 ml/min
• Detección: UV a 277 nm
• Inyección vol.: 20 µL
• Temperatura de la columna.: Ambiente

En la Figura 1 se muestra un cromatograma típico de lactato de ciprofloxacina y enrofloxacina. Los dos compuestos se resuelven bien con tiempos de retención de aproximadamente 10,52 min para el lactato de ciprofloxacina y 15,95 min para la enrofloxacina. Los parámetros cromatográficos se resumen en la Tabla 1.

Fig. 1. Cromatograma de lactato de ciprofloxacino (pico 1) y enrofloxacino (pico 2)

Tabla 1. Parámetros cromatográficos para lactato de ciprofloxacina y enrofloxacina