Determinación por HPLC de echinacósido en hierba Cistanche

• analito: equinacósido
• Sistema: EClassical 3200 HPLC Sistema con Detector UV
• Columna: Hypersil ODS2 (5 μm, 4,6 × 150 mm)
• Destacar: Un método de HPLC confiable para el análisis de echinacósidos en cistanche con buena separación y eficiencia, que cumple con los requisitos de la farmacopea.

El echinacósido es un glucósido feniletanoide natural ampliamente presente en las especies de Cistanche, una medicina tradicional china conocida por sus propiedades tónicas y antienvejecimiento. Exhibe diversas actividades farmacológicas que incluyen efectos antioxidantes, antiinflamatorios, neuroprotectores y hepatoprotectores. Según la Farmacopea China, la separación cromatográfica adecuada y la idoneidad del sistema son esenciales para una cuantificación precisa del echinacósido en Cistanche. Este informe presenta un método de HPLC para la determinación de echinacósido en la hierba Cistanche, lo que confirma que el pico cumple con los requisitos de la farmacopea y está bien separado de otros componentes.

Estándares: Echinacósido (CAS 82854-37-3)

reactivos : agua desionizada (18,2 MΩ · cm), metanol (grado HPLC), ácido fórmico (AR), otros disolventes y productos químicos necesarios para el pretratamiento de la muestra (p. ej., disolventes de extracción, membranas de filtración)

Solución de referencia: proporcionado por el cliente (ya preparado), filtrado a través de una membrana de 0,45 μm antes de la inyección.

Pesar con precisión 1,0015 g de polvo de Cistanche en un matraz aforado de 100 ml. Añadir 50 ml de metanol/agua (1:1, v/v), remojar durante 30 min y sonicar durante 40 min. Mezclar bien, dejar enfriar a temperatura ambiente, diluir a volumen con el mismo disolvente y mezclar. Tomar el sobrenadante y filtrar a través de una membrana de 0,45 μm.

Sistema HPLC : EClassical 3200 equipado con bomba cuaternaria, detector UV-vis, muestreador automático, horno de columna, bandeja para botellas de solvente, Kromstation CDS.

Equipos de pretratamiento: balanza analítica (sensibilidad de 0,0001 g), limpiador ultrasónico, centrífuga, aparato de filtración de disolventes, filtros de membrana, pipetas, etc.

Columna:              Hypersil ODS2 (5 μm, 4,6 × 150 mm)

Fase Móvil :     R: Metanol; B: solución acuosa de ácido fórmico al 0,1%, en gradiente (Tabla 1).

Tasa de flujo:          1,0 ml/min

Detección:           UV a 330 nm

Inyección vol. : 10 µL

Temperatura de la columna.:   30°C

Tabla 1. Programa de gradiente

Separación estándar

La solución de referencia se analizó en las condiciones anteriores. Se observaron dos picos principales, echinacósido (pico 1) y verbascósido (pico 2). En la Figura 1 se muestra un cromatograma representativo, los parámetros cromatográficos se resumen en la Tabla 2.

Fig. 1. Cromatograma de la solución de referencia de equinacósido. Pico 1-equinacósido 2-verbascósido

Tabla 2. Parámetros cromatográficos de echinacósido y verbascósido

Idoneidad del sistema

Según el ChP, el número de placas teórico para el pico de echinacósido no debe ser inferior a 3000. Tanto el pico de referencia como el de muestra (3604 N y 3596 N, respectivamente) cumplen este requisito. La resolución entre echinacósido y verbascósido es excelente (>18), lo que confirma una buena separación.

Análisis de muestras

La muestra de Cistanche fue analizada en las mismas condiciones. El pico de echinacósido eluyó aproximadamente a los 10,638 min, con buena forma de pico y separación de otros componentes (Figura 2). Los parámetros cromatográficos se dan en la Tabla 3.

Fig. 2. Cromatograma de una muestra de Cistanche, pico 1-equinacósido 2-verbascósido

Tabla 3. Parámetros cromatográficos de echinacósido en muestra de Cistanche