Ceftiofur es un antibiótico cefalosporínico de amplio espectro ampliamente utilizado en medicina veterinaria. La determinación precisa de ceftiofur mediante HPLC es esencial para el control de calidad de los productos farmacéuticos. Según el método de la farmacopea, un cliente informó que al usar una columna Supersil ODS2, el tiempo de retención de ceftiofur disminuía progresivamente con inyecciones consecutivas, comprometiendo la solidez y confiabilidad del método. Este estudio aborda este problema evaluando la columna SinoPak BEH T-C18 como una alternativa estable. Los resultados demuestran que la columna SinoPak BEH T-C18 mantiene tiempos de retención consistentes durante múltiples inyecciones, superando efectivamente el problema de la deriva.
Estándares: Ceftiofur (CAS 80370-57-6)
reactivos : agua desionizada (18,2 MΩ·cm), metanol (grado HPLC), hidróxido de tetrabutilamonio (10% en agua), acetato de amonio (99%), tetrahidrofurano (THF, grado HPLC), ácido acético (AR). Otros disolventes y productos químicos necesarios para el pretratamiento de la muestra (p. ej., disolventes de extracción, membranas de filtración)
Solución de acetato de amonio 0,05 mol/L: Disolver 0,385 g de acetato de amonio en 100 ml de agua.
Fase móvil: Pesar 3,95 g de acetato de amonio, añadir 67 ml de solución de hidróxido de tetrabutilamonio al 10 % y diluir hasta 700 ml con agua. Ajustar el pH a 6,3 con ácido acético. Mezclar con metanol y THF en la proporción solución de acetato de amonio/metanol/THF = 700/200/110 (v/v/v).
Pesar con precisión unos 50 mg de muestra de ceftiofur en un matraz volumétrico de 50 ml. Agregue 0,5 ml de DMF y agite para disolver. Diluir a volumen con una solución de acetato de amonio de 0,05 mol/l. Pipetear 1 ml de esta solución en un matraz aforado de 10 ml y diluir a volumen con una solución de acetato de amonio de 0,05 mol/l. Mezclar bien y filtrar a través de una membrana de 0,45 μm antes de la inyección.
Sistema HPLC : EClassical 3200 equipado con bomba cuaternaria, detector UV-vis, muestreador automático, horno de columna, bandeja para botellas de solvente, Kromstation CDS.
Equipos de pretratamiento: balanza analítica (sensibilidad de 0,0001 g), limpiador ultrasónico, centrífuga, aparato de filtración de disolventes, filtros de membrana, pipetas, etc.
Columna: SinoPak BEH T-C18 (5 µm, 4,6 × 150 mm
Fase Móvil : Solución de acetato de amonio/metanol/THF = 700/200/110 (v/v/v, preparado como anteriormente).
Tasa de flujo: 1,0 ml/min
Detección: UV a 254 nm
Inyección vol. : 10 µL
Temperatura de la columna.: 30°C
Deriva del tiempo de retención con la columna Supersil ODS2
La columna Supersil ODS2 del cliente fue probada bajo las condiciones de la farmacopea. La muestra de ceftiofur se inyectó 13 veces consecutivas. Como se muestra en la Tabla 1, el tiempo de retención disminuyó de 13,307 min en la primera inyección a 12,772 min en la decimotercera inyección, un cambio significativo de 0,535 min. Esta deriva progresiva compromete la identificación de picos y la precisión cuantitativa.
Tabla 1. Parámetros del pico de ceftiofur – columna Supersil ODS2 (1.ª vs. 13.ª inyección)
| Inyección No. | Tiempo de retención (min) | Altura máxima (mAU) | Área pico (mAU·s) | Asimetría | Número de placa (N) |
|---|---|---|---|---|---|
| 1st | 13.307 | 179.779 | 4350.04 | 0.990 | 7165 |
| 13th | 12.772 | 201.123 | 4372.56 | 0.997 | 7102 |
Rendimiento estable con columna SinoPak BEH T-C18
La misma muestra de ceftiofur se analizó utilizando la columna SinoPak BEH T-C18 en condiciones idénticas. Se realizaron trece inyecciones consecutivas. Como se resume en la Tabla 2, el tiempo de retención permaneció esencialmente sin cambios (9,428 min para la primera inyección frente a 9,345 min para la decimotercera), con un cambio insignificante de sólo 0,083 min. El área del pico, la altura, la asimetría y el número de placas también mostraron una consistencia excelente, lo que confirma la robustez y estabilidad de la columna.
Tabla 1. Parámetros del pico de ceftiofur – columna SinoPak BEH T-C18 (inyección 1.ª frente a 13.ª)
| Inyección No. | Tiempo de retención (min) | Altura máxima (mAU) | Área pico (mAU·s) | Asimetría | Número de placa (N) |
|---|---|---|---|---|---|
| 1st | 9.428 | 249.600 | 4065.07 | 1.278 | 7984 |
| 13th | 9.345 | 252.367 | 4066.79 | 1.286 | 7952 |
Los resultados demuestran claramente que la columna Supersil ODS2 muestra una variación significativa del tiempo de retención cuando se usa para el análisis de ceftiofur en condiciones de farmacopea, lo que puede conducir a una cuantificación poco confiable y a una identificación errónea de los picos. Por el contrario, la columna SinoPak BEH T-C18 proporciona una estabilidad excepcional del tiempo de retención en múltiples inyecciones, con una deriva de menos de 0,1 min después de 13 ejecuciones consecutivas. Esta estabilidad se atribuye a la avanzada tecnología de partículas BEH y a la química de enlace optimizada de la columna SinoPak BEH T-C18, que minimiza la degradación de la columna y garantiza un rendimiento cromatográfico constante. Por lo tanto, la columna SinoPak BEH T-C18 es una opción superior para el control de calidad de rutina del ceftiofur.
La columna SinoPak BEH T-C18 supera eficazmente el problema de la variación del tiempo de retención observado con las columnas C18 convencionales para el análisis de ceftiofur. Ofrece tiempos de retención estables, forma de pico consistente y rendimiento confiable en múltiples inyecciones, cumpliendo con los requisitos de los métodos de la farmacopea. Se recomienda al cliente adoptar esta columna para sus pruebas de ceftiofur para garantizar resultados precisos y reproducibles.
