Determinación por HPLC de cefoperazona y sulbactam inyectable

• analito: Cefoperazona, Sulbactam
• Sistema: EClassical 3200 HPLC con detector UV
• Columna: Hypersil ODS2 (5 μm, 4,6 × 150 mm)
• Destacar: Método de HPLC confiable para cefoperazona y sulbactam con buena resolución y forma de pico, que cumple con los requisitos de la farmacopea.

La cefoperazona es un antibiótico cefalosporínico de tercera generación y el sulbactam es un inhibidor irreversible de las β-lactamasas que mejora la actividad de los antibióticos β-lactámicos. Su combinación se usa ampliamente para tratar diversas infecciones bacterianas. Según el método de la farmacopea para cefoperazona sódica y sulbactam sódico, la separación adecuada de los dos componentes y sustancias relacionadas es esencial para el control de calidad. Este informe presenta un análisis de HPLC de los estándares de referencia de cefoperazona y sulbactam utilizando un sistema iChrom5100, abordando un problema en el que no se observó un pico de degradación de cefoperazona con una columna nueva, pero apareció con una columna más antigua del mismo tipo. La verificación del método se realizó para garantizar la idoneidad del sistema y la resolución máxima.

Estándares: Estándar de referencia de cefoperazona y estándar de referencia de sulbactam (proporcionados por el cliente)

reactivos : agua desionizada (18,2 MΩ · cm), acetonitrilo (grado HPLC), hidróxido de tetrabutilamonio (solución al 55 %, AR), ácido fosfórico (AR, para ajuste de pH), dihidrógeno fosfato de sodio (AR), hidrógeno fosfato disódico (AR), otros disolventes y productos químicos necesarios para el pretratamiento de la muestra (p. ej., disolventes de extracción, membranas de filtración)

Preparación de solución estándar

Tampón fosfato (0,2 mol/L): Disolver 1,217 g de dihidrogenofosfato de sodio y 4,369 g de hidrogenofosfato de disodio en agua, diluir a 100 ml en un matraz aforado.

Solución de hidróxido de tetrabutilamonio (0,005 mol/L, pH 4,0): Pipetear 2,4 ml de solución de hidróxido de tetrabutilamonio al 55% en un matraz volumétrico de 1 litro, agregar aproximadamente 900 ml de agua, ajustar el pH a 4,0 con ácido fosfórico y diluir a volumen.

Solución de prueba de cefoperazona (2 mg/ml): Pesar con precisión aproximadamente 20,4 mg de muestra de cefoperazona en un matraz volumétrico de 10 ml, agregar 1 ml de tampón fosfato para disolver y luego diluir a volumen con la fase móvil.

Solución de prueba de sulbactam (2 mg/ml): Pesar con precisión alrededor de 20,9 mg de muestra de sulbactam en un matraz volumétrico de 10 ml, agregar 1 ml de tampón fosfato para disolver y luego diluir a volumen con la fase móvil.

Solución de prueba mixta (1 mg/ml cada una): Pipetee 0,5 ml de cada solución de prueba de cefoperazona y sulbactam en un vial y mezcle bien.

Todas las soluciones se filtran a través de una membrana de 0,45 μm antes de la inyección.

No se requiere ningún tratamiento previo adicional más allá de la disolución y la filtración.

Sistema HPLC : EClassical 3200 equipado con bomba cuaternaria, detector UV-vis, muestreador automático, horno de columna, bandeja para botellas de solvente, Kromstation CDS.

Equipos de pretratamiento: balanza analítica (sensibilidad de 0,0001 g), limpiador ultrasónico, centrífuga, aparato de filtración de disolventes, filtros de membrana, pipetas, etc.

Columna:              Hypersil ODS2 (5 μm, 4,6 × 150 mm)

Fase móvil: Acetonitrilo / 0,005 mol/L de solución de hidróxido de tetrabutilamonio (pH ajustado a 3,98) = 25 / 75 (v/v)

Tasa de flujo:          1,0 ml/min

Detección:           UV a 220 nm

Inyección vol. : 10 µL

Temperatura de la columna.:   30°C

La solución de prueba mixta (cefoperazona y sulbactam) se analizó en las condiciones anteriores. En la Figura 1 se muestra un cromatograma representativo. Se observaron cinco picos principales con tiempos de retención de aproximadamente 3,544, 5,160, 5,780, 6,876 y 11,606 min. El par crítico para la idoneidad del método son los picos a los 5.160 min y 5.780 min, que corresponden a una sustancia relacionada con cefoperazona y sulbactam, respectivamente. Su resolución se calculó en 2,866, muy por encima del 1,5 requerido. La forma del pico de sulbactam es aceptable (asimetría 1,937) y el pico principal de cefoperazona muestra buena simetría. Los parámetros cromatográficos se resumen en la Tabla 1.

Fig. 1. Cromatograma de la solución de prueba mixta (cefoperazona y sulbactam)

Tabla 1. Parámetros cromatográficos de la solución de prueba mixta de cefoperazona y sulbactam