La natamicina es un compuesto antifúngico natural producido por Streptomyces, que inhibe mohos y levaduras sin afectar a las bacterias. La natamicina se usa ampliamente para la conservación de superficies en productos horneados, pasteles de luna, productos cárnicos, productos de queso y más. Este protocolo se basa en GB/T 21915-2008 y tiene como objetivo establecer un método de detección sensible, preciso y reproducible para satisfacer las necesidades de monitoreo de rutina de los fabricantes de alimentos y las autoridades reguladoras del contenido de natamicina. Este método exhibe una linealidad excelente (R = 1,0000) dentro del rango de 1 a 30 μg/ml y logra una tasa de recuperación elevada del 102,7 %, lo que permite una evaluación confiable de los residuos de natamicina en matrices complejas como la torta.
Estándares: Natamicina (contenido≥98,3%).
reactivos: Metanol (grado cromatográfico), ácido acético glacial (grado analítico), agua desionizada (18,2 MΩ).
Soluciones en stock: Disolver 10 mg de natamicina en fase móvil y diluir a 10 ml en un matraz aforado para obtener 1 mg/ml.
Soluciones de trabajo en serie: Diluir la solución estándar a concentraciones de 1, 2, 5, 10, 20, 30 μg/ml.
Muestra: Pese con precisión 5 g de muestra en un tubo de centrífuga de 50 ml. Añadir 30 ml de metanol, sonicar durante 30 min. Añadir 10 ml de agua, mezclar bien y luego centrifugar a 3500 r/min durante 5 min. Filtrar el sobrenadante a través de un filtro de membrana de 0,45 μm antes del análisis.
Muestra con pinchos: Pese con precisión 5 g de muestra en un tubo de centrífuga de 50 ml. Agregue 0,4 ml de solución estándar de natamicina de 100 μg/ml y luego agregue 29,6 ml de metanol. Los pasos siguientes son los mismos que para la muestra.
Sistema de cromatografía líquida: EClassical 3200 (incluye bomba de flujo constante de alta presión P3200, detector UV-vis D3200, muestreador automático S3200, O3220 Column Oven, etc.)
Equipo de pretratamiento: Aparatos de filtración de disolventes, bomba de vacío de diafragma, limpiador ultrasónico, balanza electrónica de precisión, mezclador vórtex, centrífuga, matraces aforados, micropipetas, etc.
Separación estándar
El tiempo de retención de natamicina fue de 3,03 min, factor de cola de 1,01 (Figura 1).
Figura 1. Cromatograma de una solución estándar de natamicina de 5 μg/ml
Linealidad
Dentro de 1~30μg/mL, ecuación lineal y=43,862x+3,9647 para natamicina, R=1,0000.
Análisis de muestras
Los resultados del análisis de una muestra comercial de pastel de panecillo suizo se muestran en las Figuras 2 y 3. El contenido de natamicina fue de 0,41 g/kg, con una tasa de recuperación aumentada del 102,7 %.
Figura 2. Cromatograma de natamicina (pico 1) en una muestra de pastel de panecillo suizo
Figura 3. Cromatograma de natamicina (pico 1) en una solución de muestra de pastel de panecillo suizo enriquecida con 1 ug/ml de natamicina
