Determinación de Inmunoglobulina G (IgG) en Productos Lácteos

• analito: Inmunoglobulina G (IgG)
• Sistema: EClassical 3200 HPLC Sistema con Detector UV
• Columna: Columna de proteína G Pharmacia Hi-Trap (1 ml)
• Destacar: Método confiable de afinidad por HPLC para la cuantificación de IgG en productos lácteos

La inmunoglobulina G (IgG) es una proteína activa en anticuerpos presente en productos lácteos como el calostro bovino. Proporciona inmunidad pasiva a los recién nacidos y mejora la resistencia a las enfermedades. En el procesamiento de lácteos, el contenido de IgG se utiliza a menudo como un indicador importante del calostro y de la calidad funcional del producto lácteo. La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es un método común para la detección de IgG, que normalmente emplea una columna de afinidad de proteína G para la separación con detección UV a 280 nm. Este método, basado en la norma nacional GB/T 5009.194-2003, aísla y cuantifica eficazmente la IgG en productos lácteos y es adecuado para el control de calidad de materias primas y productos terminados. 

Estándares: Estándar de referencia de inmunoglobulina G (grado analítico)

reactivos : Tampón fosfato 0,05 mol/L (pH 6,5), tampón glicina-HCl 0,05 mol/L (pH 2,5), filtros de membrana microporosa de 0,45 μm, agua desionizada (18,2 MΩ·cm). 

I Solución madre de gG (1,0 mg/ml): Pesar con precisión 0,010 g de estándar de IgG, disolverlos en tampón fosfato de 0,05 mol/l (pH 6,5) y diluir a 10,0 ml en un matraz volumétrico. Mezclar bien.

• Pesar con precisión 0,1 g (a 0,001 g) de la muestra de prueba.
• Disolver y diluir a 25,0 ml con fase móvil A en un matraz aforado. Mezclar bien.
• Pipetear 10,0 ml de esta solución en otro recipiente y diluir a 30,0 ml con la fase móvil A.
• Filtrar a través de un filtro de membrana de 0,45 μm antes de la inyección de HPLC.

Sistema HPLC : EClassical 3200 equipado con bomba de alta presión P3200, D3210 UV-Vis Detector, muestreador automático S3210, O3220 Column Oven, bandeja para botellas de solvente T3200, Kromstation CDS.

Equipos de pretratamiento : Balanza analítica, matraces aforados, aparatos de filtración por membrana, etc.

• Columna: Columna de proteína G Pharmacia Hi-Trap (1 ml)
• Fase Móvil: A: tampón fosfato 0,05 mol/L (pH 6,5), B: tampón glicina-HCl 0,05 mol/L (pH 2,5), en gradiente (Tabla 1)
• Tasa de flujo: 0,4 ml/min
• Detección: UV a 280 nm
• Inyección vol.: 20 µL
• Temperatura de la columna.: Ambiente

Tabla 1. Programa de gradiente

En la Figura 1 se muestran los cromatogramas típicos de las muestras A y B de polvo de calostro bovino. Los picos de IgG están bien resueltos con tiempos de retención de aproximadamente 10,94 min. Los parámetros cromatográficos se resumen en la Tabla 2.

Fig. 1. Cromatograma de las muestras A y B de polvo de calostro bovino

Tabla 1. Parámetros cromatográficos de IgG en muestras de calostro bovino