Determinación de cafeína en miel mediante HPLC

• analito: Cafeína
• Sistema: EClassical 3200 HPLC Sistema con Detector UV
• Columna: SinoChrom ODS-BP (5 µm, 4,6 × 250 mm)
• Destacar: Método HPLC-UV fiable para el análisis de cafeína en miel

La miel es un alimento saludable natural rico en carbohidratos y diversos compuestos bioactivos. La cafeína, un estimulante del sistema nervioso central, a veces se encuentra en la miel y el Comité Olímpico Internacional la regula como sustancia dopante. Por lo tanto, controlar los niveles de cafeína en la miel es importante para la calidad y la seguridad. 

Estándares: Estándar de referencia de cafeína (≥99%)

reactivos : Acetonitrilo (grado HPLC), ácido acético glacial (grado analítico), solución de hidróxido de sodio (grado analítico), cloroformo (grado analítico), agua desionizada (18,2 MΩ·cm). 

Solución madre (1 mg/ml): Pesar con precisión 0,1 g (a 0,0001 g) de estándar de cafeína, disolverlos en agua y diluir hasta 100 ml en un matraz volumétrico.

Estándares de trabajo: diluya la solución madre con agua a las concentraciones adecuadas según sea necesario para la calibración (p. ej., 0,5, 1,0, 2,0, 5,0, 10,0 μg/ml). Prepárelo fresco antes de usarlo.

1. Pese con precisión 20 g (a 0,01 g) de muestra de miel en un tubo de centrífuga de 50 ml.
2. Agregue 10 ml de solución de hidróxido de sodio y mezcle bien.
3. Agregue exactamente 20,0 ml de cloroformo, tape el tubo y mezcle con vórtex durante 5 minutos.
4. Centrifugar a 2000 r/min durante 5 min. Deseche la capa acuosa superior.
5. Lavar la fase orgánica dos veces con 5 ml de solución de hidróxido de sodio, desechando la capa acuosa cada vez.
6. Mezclar la fase orgánica y filtrar a través de papel de filtro seco, desechando los primeros 3 mL de filtrado.
7. Recoger 10,0 ml del filtrado y evaporar hasta casi sequedad bajo una corriente de aire a 45°C.
8. Disolver el residuo en exactamente 2,0 ml de agua y filtrar a través de un filtro de membrana de 0,45 μm antes del análisis por HPLC.

Sistema HPLC : EClassical 3200 equipado con bomba de alta presión P3200, D3210 UV-Vis Detector, muestreador automático S3210, O3220 Column Oven, bandeja para botellas de solvente T3200, Kromstation CDS.

Equipos de pretratamiento : Centrífuga, rotavapor, evaporador de nitrógeno, mezclador vórtex, balanza analítica, aparatos de filtración, etc.

Columna :              Columna SinoChrom ODS-BP (5 μm, 4,6 × 250 mm)

Fase Móvil :     Acetonitrilo / Agua / Ácido acético = 16 / 83 / 1 (v/v/v)

Tasa de flujo :          1,0 ml/min

Detección :           UV a 273 nm

Inyección vol. :     20 µL

Temperatura de la columna. :   40°C

En la Figura 1 se muestra un cromatograma típico de una muestra de miel que contiene cafeína. La forma del pico y el tiempo de retención son adecuados para la cuantificación.

Fig. 1. cromatograma de una muestra de miel.