Determinación de ácido benzoico y ácido sórbico en bebidas gaseosas

• analito: Ácido Benzoico, Ácido Sórbico
• Sistema: EClassical 3200 HPLC
• Columna: Supersil AQ-C18 (5μm, 4,6×250mm)
• Destacar: Detección de dos conservantes en bebidas gaseosas con buena resolución y linealidad.

El ácido benzoico y el ácido sórbico son conservantes sintéticos de uso común. El ácido benzoico es económico pero ligeramente más tóxico, mientras que el sorbato de potasio tiene una fuerte actividad antibacteriana y baja toxicidad. Este protocolo determina el ácido benzoico y el ácido sórbico en alimentos mediante cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) según la norma nacional GB5009.28-2016.

Estándares: Ácido benzoico (grado analítico), ácido sórbico (contenido ≥98%)

reactivos: Metanol (grado cromatográfico), acetato de amonio (grado analítico), agua desionizada (18,2 MΩ)

Soluciones en stock: Pesar con precisión 0,1 g de ácido benzoico y ácido sórbico por separado, disolverlos y diluirlos a 100 ml con metanol para obtener soluciones madre estándar únicas de 1 mg/ml.

Solución estándar mixta: Pipetear 10 ml de cada solución madre en un matraz aforado de 50 ml y diluir a volumen con metanol para obtener una solución estándar mixta de 0,2 mg/ml.

Soluciones de trabajo en serie: Diluir la solución estándar mixta a concentraciones de 2, 5, 10, 20, 50, 100, 200 mg/L.

Pese con precisión 2 g de la muestra (hasta 0,001 g) en un tubo de centrífuga de 50 ml. Agregue aproximadamente 25 ml de agua, mezcle con vórtex y someta a ultrasonidos en un baño de agua a 50 °C durante 20 minutos. Enfriar a temperatura ambiente, luego centrifugar a 8000 r/min durante 5 min. Transfiera la fase acuosa a un matraz aforado de 50 ml, diluya a volumen con agua, mezcle bien y filtre a través de un filtro de membrana de 0,45 μm antes del análisis.

Sistema de cromatografía líquida: EClassical 3200 (incluye bomba de flujo constante de alta presión P3200, detector UV-Vis D3200, muestreador automático S3200, O3220 Column Oven, etc.)

Equipo de pretratamiento: Aparatos de filtración de disolventes, bomba de vacío de diafragma, limpiador ultrasónico, balanza electrónica de precisión, mezclador vórtex, centrífuga, matraces aforados, micropipetas, etc.

• Columna: Supersil AQ-C18 (5μm, 4,6×250mm)
• Fase Móvil: Solución de metanol/acetato de amonio 0,02 M = 5/95 (V/V)
• Tasa de flujo: 1,0 ml/min
• Detección: UV a 230 nm
• Volumen de inyección: 10 µL
• Temperatura de la columna.: Ambiente

Separación estándar

El tiempo de retención para el ácido benzoico fue de 10,90 min, para el ácido sórbico de 14,93 min, con buena resolución (Figura 1).

Fig. 1. Cromatograma de una solución estándar mixta de 20 mg/L de ácido benzoico y ácido sórbico

Linealidad

Dentro de 2~200 mg/L, ecuación lineal y=35,552x+13,847 para ácido benzoico, R=0,9997; y=68,224x-48,443, R=0,9995 para ácido sórbico:

Análisis de muestras

Los resultados del análisis de muestra de una bebida gaseosa comercial se muestran en la Figura 2 y la Tabla 1, el contenido de ácido benzoico fue de 0,1165 g/kg y el de ácido sórbico fue de 0,1035 g/kg.

Fig. 2. Cromatograma de ácido benzoico y ácido sórbico en bebidas carbonatadas.

Tabla 1. Resultados del análisis de muestras