La amoxicilina sódica es un antibiótico penicilino de amplio espectro, mientras que el clavulanato de potasio es un inhibidor de la β-lactamasa que protege a la amoxicilina de la degradación enzimática. Su combinación se utiliza ampliamente en preparaciones farmacéuticas. Según la Farmacopea China de 2025 (borrador), la prueba de idoneidad del sistema para el análisis HPLC requiere factores de cola entre 0,8 y 1,8 para el análisis cuantitativo utilizando el área del pico. Este informe presenta un método de HPLC para la determinación de amoxicilina sódica y clavulanato de potasio utilizando un sistema Elite 3200 con detección UV, que cumple con los requisitos de la farmacopea.
reactivos: ácido fosfórico (AR), dihidrógenofosfato de sodio (AR), metanol (grado HPLC), agua desionizada (18,2 MΩ·cm), otros disolventes y productos químicos necesarios para el pretratamiento de la muestra (p. ej., disolventes de extracción, membranas de filtración)
muestra de prueba: amoxicilina sódica y clavulanato de potasio inyectable (proporcionada por el cliente)
Solución de idoneidad del sistema: Pesar con precisión 0,0084 g de la muestra de prueba en un matraz volumétrico de 10 ml, disolver y diluir al volumen con la fase móvil.
Solución de muestra: Pesar con precisión 0,0112 g de la muestra de prueba en un matraz volumétrico de 10 ml, disolver y diluir al volumen con agua purificada.
Todas las soluciones se filtran a través de una membrana de 0,45 µm antes de la inyección.
Sistema HPLC : EClassical 3200 equipado con bomba cuaternaria, detector UV-vis, muestreador automático, horno de columna, bandeja para botellas de solvente, Kromstation CDS.
Equipos de pretratamiento: balanza analítica (sensibilidad de 0,0001 g), limpiador ultrasónico, centrífuga, aparato de filtración de disolventes, filtros de membrana, pipetas, etc.
Columna: SinoPak BEH AQ (5 µm, 4,6×250 mm)
Fase móvil: solución de dihidrogenofosfato de sodio 0,05 mol/L (pH ajustado a 4,0 con ácido fosfórico)/metanol = 95/5 (v/v)
Tasa de flujo: 1,0 ml/min
Detección: UV a 220 nm
Inyección vol. : 20 µL
Temperatura de la columna.: 30°C
S solución de idoneidad del sistema s separación
En la Figura 1 se muestra un cromatograma típico de la solución de idoneidad del sistema. Cuatro picos principales están bien resueltos con tiempos de retención de aproximadamente 5,845, 7,042, 8,006 y 9,139 min. Los parámetros cromatográficos se resumen en la Tabla 1 y todos cumplen con los requisitos de ChP (factor de cola 0,8–1,8, resolución> 1,5).
Fig. 1. Cromatograma de la solución de idoneidad del sistema. Picos, 1-amoxicilina, 2-clavulanato, 3-y 4-impurezas
Tabla 1. Parámetros cromatográficos de la solución de idoneidad del sistema.
| Pico No. | Tiempo de retención (min) | Área pico (mAU·s) | Factor de cola | Número de placa (N) | Resolución |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 5.845 | 502.231 | 1.263 | 14311 | – |
| 2 | 7.042 | 479.725 | 1.023 | 11560 | 5.237 |
| 3 | 8.006 | 105.851 | 1.117 | 12050 | 3.480 |
| 4 | 9.139 | 1523.332 | 1.127 | 12274 | 3.647 |
Rendimiento del método
Repetibilidad del método
La solución de muestra se inyectó diez veces consecutivas (Figura 2). Los RSD del tiempo de retención para los cuatro picos estuvieron por debajo del 0,33%, lo que indica una excelente precisión del sistema. Tenga en cuenta que los picos 2 y 3 (tiempos de retención ~6,95 y 7,99 min) mostraron áreas de pico crecientes con el tiempo (posiblemente debido a la inestabilidad), por lo que no se calcularon sus RSD de área. Los datos detallados se dan en la Tabla 2.
Fig. 2. Cromatograma superpuesto de 10 inyecciones de muestra replicadas.
Tabla 2. Repetibilidad del análisis de muestras (10 inyecciones)
| Pico No. | Tiempo de retención RSD (%) | Área RSD (%) | Rango de factor de cola | Rango de número de placa |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 0.15 | – | 1.21–1.26 | 14409–14814 |
| 2 | 0.33 | – | 0.91–1.04 | 6279–7856 |
| 3 | 0.15 | – | 1.04–1.07 | 11360–37878 |
| 4 | 0.20 | – | 0.93–0.94 | 12181–12456 |
Los resultados demuestran que el sistema HPLC Elite 3200 equipado con una columna SinoPak BEH AQ cumple con los requisitos de idoneidad del sistema de la farmacopea china para el análisis de amoxicilina sódica y clavulanato de potasio. Todos los picos exhiben factores de cola entre 0,8 y 1,8 y resoluciones >1,5. El método muestra una buena precisión del tiempo de retención (RSD <0,33%).
