Los compuestos fenólicos son sustancias químicas moderadamente tóxicas que pueden causar intoxicación crónica en bajas concentraciones y toxicidad aguda en niveles altos. Entran al medio ambiente principalmente a través de aguas residuales industriales procedentes de fuentes como la coquización, la refinación de petróleo, la síntesis química y la fabricación de plásticos. Los fenoles pueden absorberse a través de la piel, las membranas mucosas y el tracto respiratorio, lo que plantea riesgos para la salud. La norma china HJ 638-2012 especifica un método de HPLC para la determinación de compuestos fenólicos en el aire ambiente. Esta solución presenta el método de HPLC para el análisis de 12 fenoles (fenol, 2-metilfenol, 3-metilfenol, 4-metilfenol, 1,3-bencenodiol, 4-clorofenol, 2,6-dimetilfenol, 1-naftol, 2-naftol, 2,4,6-trinitrofenol, 2,4-dinitrofenol, 2,4-diclorofenol) con la columna Supersil Phenyl, con la que se logra la separación completa de todos los compuestos objetivo.
Estándares de fenol
Fenol, 2-metilfenol, 3-metilfenol, 4-metilfenol, 1,3-bencenodiol, 4-clorofenol, 1-naftol, 2-naftol, 2,6-dimetilfenol, 2,4,6-trinitrofenol, 2,4-dinitrofenol, 2,4-diclorofenol (todos con una pureza ≥99%).
Reactivos
Metanol (grado HPLC), agua desionizada (≥18.2 MΩ·cm),
Otros materiales
Matraces aforados, pipetas, filtros de membrana (0.45 μm), etc.
Preparación de solución estándar
Solución madre (1000 mg/L cada una): Pesar con precisión 0.050 g de cada fenol en un matraz aforado de 50 mL, disolver en metanol y diluir a volumen. Conservar a 4°C en la oscuridad.
Solución estándar de trabajo (100 mg/L): Pipetear 1.0 mL de la solución madre en un matraz aforado de 10 mL y diluir a volumen con metanol.
La preparación de las muestras sigue la norma HJ 638-2012. Para muestras de aire, recoja el material particulado en filtros y adsorba los fenoles gaseosos en tubos adsorbentes. Extraiga con metanol mediante sonicación o extracción Soxhlet. Concentre el extracto si es necesario y filtre a través de una membrana de 0.45 μm antes del análisis.
Sistema de HPLC
EClassical 3200 configurado con bomba de alta presión P3220, detector UV-Vis UV3210, horno de columna O3220, inyector manual Rheodyne 7725 (o muestreador automático S3210 opcional), estación de datos de cromatografía, bandeja de disolventes TP3200
Equipos de pretratamiento
Aparatos de filtración de disolventes, bombas de vacío, limpiadores ultrasónicos, etc.
Fase móvil: A: acetonitrilo; B: agua, en gradiente (Tabla 1)
Tabla 1. Programa de gradiente
| Tiempo (min) | A% | B% |
|---|---|---|
| 0 | 13 | 87 |
| 5 | 13 | 87 |
| 25 | 35 | 65 |
| 35 | 13 | 87 |
Caudal: 1.5 mL/min
Detección: UV a 223 nm
Volumen de inyección: 10 μL
Temperatura de la columna: 25°C
Con la columna Supersil Phenyl, los 12 fenoles se separaron con resolución de línea base (Figura 1). Los parámetros cromatográficos se resumen en la Tabla 2.
Figura 1. Cromatograma de 12 fenoles en columna Supersil Phenyl (separación completa)
Tabla 2. Parámetros cromatográficos en la columna Supersil Phenyl
| Pico | Compuesto | RT (min) | Área de pico (mV·s) | Asimetría | Número de platos (N) | Resolución |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 2,4-dinitrofenol | 4.46 | 39.80 | 1.01 | 1983 | – |
| 2 | 1,3-bencenodiol | 5.40 | 56.61 | 1.21 | 15125 | 3.26 |
| 3 | 2,4,6-trinitrofenol | 7.09 | 25.31 | 1.83 | 11183 | 3.31 |
| 4 | Fenol | 10.65 | 42.02 | 1.22 | 26142 | 6.42 |
| 5 | 3-metilfenol | 16.55 | 31.90 | 0.78 | 32567 | 18.78 |
| 6 | 4-metilfenol | 16.78 | 60.93 | 1.87 | 39636 | 0.65 |
| 7 | 2-metilfenol | 17.35 | 53.53 | 1.99 | 26695 | 1.52 |
| 8 | 4-clorofenol | 21.45 | 26.56 | 1.13 | 73187 | 11.09 |
| 9 | 2,6-dimetilfenol | 23.00 | 459.82 | 1.02 | 77741 | 4.79 |
| 10 | 2-naftol | 27.26 | 135.45 | 1.13 | 131910 | 13.56 |
| 11 | 2,4-diclorofenol | 28.40 | 320.60 | 0.25 | 31489 | 2.42 |
| 12 | 1-naftol | 28.82 | 39.80 | 1.48 | 81008 | 0.81 |
La columna Supersil Phenyl cumple con los requisitos de HJ 638-2012 y ofrece una separación superior, resolviendo los 12 fenoles en la línea base. El método muestra una buena simetría de pico y una alta eficiencia de columna.
El método de HPLC que utiliza columnas Supersil ODS2 o Supersil Phenyl proporciona una determinación eficaz de 12 compuestos fenólicos en muestras ambientales. La columna Supersil Phenyl logra una separación completa de todos los analitos, lo que la convierte en la opción preferida para un análisis exhaustivo.
