La miel es una sustancia dulce natural producida por las abejas a partir del néctar. Se compone principalmente de carbohidratos (alrededor del 75%) y agua (alrededor del 25%), siendo la fructosa y la glucosa los azúcares predominantes. La adulteración de la miel con azúcares económicos, como sacarosa, maltosa o jarabes, es una práctica común. Por lo tanto, la determinación precisa de fructosa, glucosa, sacarosa y maltosa es esencial para el control de calidad.
Estándares: Fructosa, glucosa, sacarosa y maltosa (grado analítico)
Reactivos: Acetonitrilo (grado HPLC), solución de acetonitrilo al 40% (para preparación de muestras y estándares), agua desionizada (18.2 MΩ·cm).
Soluciones madre
Pesar con precisión 2.5 g de fructosa y 2.0 g de glucosa (0.0001 g), disolver en solución de acetonitrilo al 40% y diluir a 50 mL en matraces volumétricos. Estas son las soluciones madre de fructosa y glucosa.
Pesar con precisión 1.0 g de sacarosa y 1.0 g de maltosa (0.0001 g), disolver en solución de acetonitrilo al 40% y diluir a 50 mL en matraces volumétricos. Estas son las soluciones madre de sacarosa y maltosa.
Estándares de trabajo mixtos
Prepare una serie de soluciones estándar mixtas según la Tabla 1, combinando los volúmenes adecuados de las soluciones madre y diluyendo hasta los volúmenes especificados con acetonitrilo al 40%. Las concentraciones cubren los intervalos: fructosa (1.00–3.00 g/100mL), glucosa (0.80–2.40 g/100mL), sacarosa (0.05–0.60 g/100mL) y maltosa (0.05–0.60 g/100mL).
Tabla 1. Preparación de las soluciones de trabajo estándar para fructosa, glucosa, sacarosa y maltosa
| Volumen de solución madre de fructosa/glucosa (μL) | Volumen de solución madre de sacarosa/maltosa (μL) | Volumen final (mL) | Concentración de la solución de trabajo estándar (g/100mL) | |||
| Fructosa | Glucosa | Sacarosa | Maltosa | |||
| 200 | 25 | 1 | 1.00 | 0.80 | 0.050 | 0.050 |
| 300 | 50 | 1 | 1.50 | 1.20 | 0.100 | 0.100 |
| 400 | 100 | 1 | 2.00 | 1.60 | 0.20 | 0.20 |
| 500 | 200 | 1 | 2.50 | 2.00 | 0.40 | 0.40 |
| 300 | 140 | 0.5 | 3.00 | 2.40 | 0.60 | 0.60 |
Pesar con precisión 2.5 g de muestra de miel (0.0001 g) en un recipiente adecuado. Disolver en solución de acetonitrilo al 40%, transferir a un matraz volumétrico de 50 mL, enrasar con el mismo disolvente. Mezclar bien y filtrar a través de una membrana de filtro adecuada antes del análisis por HPLC.
Sistema de HPLC: EClassical 3200 equipado con bomba de alta presión P3200, detector de índice de refracción (RID), muestreador automático S3210, horno de columna O3220, bandeja para frascos de disolvente T3200, Kromstation CDS.
Equipos de pretratamiento: balanza analítica, limpiador ultrasónico, equipo de filtración de disolventes, bomba de vacío, matraces volumétricos, pipetas, filtros de jeringa, etc.
Separación del estándar y de la muestra de miel
En la Figura 1 se muestra un cromatograma típico de un estándar mixto y de una muestra de miel. Los cuatro azúcares están bien separados en las condiciones descritas, lo que permite una cuantificación fiable.
Fig. 1. Cromatograma de un estándar mixto y de una muestra de miel
Linealidad y análisis de la muestra de miel
Las curvas de calibración se construyeron con la serie de estándares mixtos. Las ecuaciones de regresión lineal y los coeficientes de correlación se resumen en la Tabla 2. El método muestra una linealidad excelente en los rangos ensayados.
Tabla 2. Ecuaciones lineales y resultados de muestra para miel de árbol
| Azúcar | Ecuación de regresión | Coeficiente de correlación (R) | Concentración (g/100mL) | Contenido (g/100g) |
|---|---|---|---|---|
| Fructosa | y = 0.00015 x - 0.028 | 0.9991 | 1.9559 | 39.19 |
| Glucosa | y = 0.00017 x - 0.0022 | 0.9985 | 1.9308 | 38.62 |
| Sacarosa | y = 0.00016 x - 0.0079 | 0.9996 | 0.0001 | 0.002 |
| Maltosa | y = 0.00021 x - 0.013 | 0.9988 | 0.0720 | 1.44 |
*Nota: x = área del pico; y = concentración (g/100mL).
La idoneidad del sistema se evaluó de acuerdo con los requisitos de la Farmacopea China para la miel. Los resultados (Tabla 3) indican que la muestra cumple todas las especificaciones: fructosa+glucosa >60% (70.41%), relación fructosa/glucosa >1.0 (1.09), sacarosa <5.0% (0.23%) y maltosa <5.0% (1.79%). El método es fiable y adecuado para el análisis rutinario de azúcares en miel.
Tabla 3. Idoneidad del sistema según la Farmacopea China
| Parámetro | Requisito | Medido | Conclusión |
|---|---|---|---|
| Platos teóricos (fructosa) | ≥2000 | 6200 | Cumple |
| Fructosa + glucosa total | ≥60.0% | 70.41% | Cumple |
| Relación fructosa/glucosa | ≥1.0 | 1.09 | Cumple |
| Contenido de sacarosa | ≤5.0% | 0.23% | Cumple |
| Contenido de maltosa | ≤5.0% | 1.79% | Cumple |
